PCR 仪

PCR 仪的工作原理是什么？PCR 使用 Taq 等热稳定 DNA 聚合酶、两条位于靶标两侧的引物、脱氧核苷三磷酸和缓冲液来拷贝目标序列。加热模块使反应在约 95 °C（双链 DNA 解链）、50 至 65 °C（引物退火）和 72 °C（延伸）之间循环。重复 25 至 45 个循环可使产物每轮翻倍，因此在试剂耗尽前扩增呈指数增长。终点法热循环仪在反应结束后用凝胶或毛细管系统检测产物，实时荧光仪器则每循环用嵌入染料或水解探针测量荧光，循环阈值反映起始模板量。定量结果需要标准曲线或内参基因，熔解曲线分析用于检查产物特异性，或通过高分辨率熔解检测序列变异。RNA 靶标需增加逆转录步骤。## PCR 仪有哪些型号？- 终点法 PCR 热循环仪：完成扩增后产物留待凝胶或毛细管电泳分析的加热循环仪。- 实时荧光定量 PCR 系统：在每循环测量荧光以实现闭管定量的 96 孔仪器，支持基因表达分析、病原体载量测定以及结合标准曲线的检测方法验证。- 高分辨率熔解 PCR 分析系统：具备精密温度控制和饱和染料的实时荧光 PCR 平台，可分辨微小熔解温度差异，无需探针或测序即可区分序列变异和基因型。- 病原体组合检测多重 PCR 系统：配置四至六个光学通道、组合检测软件和经验证试剂流程的实时荧光 PCR 仪器，可在单一反应中检测多种病原体。- 便携式现场 PCR 仪：紧凑低功耗的热循环仪或实时荧光仪器，配小型模块、加固外壳以及电池或 12 V 供电。## 如何选择合适的型号？首先确定需要定性检测、相对或绝对定量还是序列变异区分，这决定在终点法热循环仪与实时荧光和熔解分析系统之间的选择。其次确定光学通道数量，多重检测组合需要二至六个通道及匹配的滤光片组。通量取决于板式：96 孔适合多数实验室，384 孔板和自动化适合高通量筛查。检查加热模块类型、最大升降温速率、温度均匀性和梯度功能，这些有助于优化新引物组。用于现场检测时，应考虑体积、供电方式和环境温度耐受性。确认分析软件、导出格式、引物探针支持情况以及质量体系所需的验证文件。## PCR 仪用于哪些领域？PCR 仪广泛用于基因表达分析和转录本定量、临床和食品样品中的病原体检测、基因分型和突变筛查、克隆和测序用模板制备、农业和环境 DNA 检测。## 适用哪些标准与认证？PCR 仪相关工作通常依据 ISO 13485 manufacturing、MIQE guidelines、CLSI MM03-A2、CLSI MM06-A2、IEC 61010-1、IVDR (EU) 2017/746。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？扩增前和扩增后的操作应在不同区域进行，并使用专用移液器和滤芯吸头，因为扩增产物残留是假阳性的主要原因。用新鲜次氯酸盐或经验证的除污剂清洁台面和设备，条件允许时使用紫外照射，并经常更换手套。每年用标准温度计和染料板校准加热模块温度和光学通道，并检查整块模块的均匀性。每次运行用阳性、阴性对照和标准曲线验证性能，并记录 Ct 值、扩增效率和熔解温度。引物和探针应按推荐温度分装小份保存，避免反复冻融，荧光探针需避光。