终点法 PCR 热循环仪

什么是终点法 PCR 热循环仪？完成扩增后产物留待凝胶或毛细管电泳分析的加热循环仪。是常规检测、菌落筛选和测序前模板制备的经济型主力设备。## 概述

终点法热循环仪配 96 孔 0.2 mL 管样品模块或 384 孔板模块，部分机型提供用于大体积反应的 0.5 mL 规格。珀尔帖元件在加热盖控制下对模块升温和降温，加压热盖防止冷凝。1 至 5 °C/s 的可编程升降温速率、用于引物优化的梯度行以及延长高温保持步骤支持标准和降落 PCR 方案。重复性取决于模块温度均匀性（通常为 ±0.3 至 0.5 °C）以及各孔升降温速率的一致性。运行结束后，产物连同分子量标记上样于琼脂糖凝胶，或在毛细管系统中分析。软件保存程序、记录运行日志，通常支持 USB 导出以便留档。## 工作原理是什么？PCR 使用 Taq 等热稳定 DNA 聚合酶、两条位于靶标两侧的引物、脱氧核苷三磷酸和缓冲液来拷贝目标序列。加热模块使反应在约 95 °C（双链 DNA 解链）、50 至 65 °C（引物退火）和 72 °C（延伸）之间循环。重复 25 至 45 个循环可使产物每轮翻倍，因此在试剂耗尽前扩增呈指数增长。终点法热循环仪在反应结束后用凝胶或毛细管系统检测产物，实时荧光仪器则每循环用嵌入染料或水解探针测量荧光，循环阈值反映起始模板量。定量结果需要标准曲线或内参基因，熔解曲线分析用于检查产物特异性，或通过高分辨率熔解检测序列变异。RNA 靶标需增加逆转录步骤。## 主要特点有哪些？- 96 孔 0.2 mL 模块，可选 384 孔或 0.5 mL 规格。- 珀尔帖加热，配加压热盖。- 可编程升降温速率 1 至 5 °C/s。- 梯度模块，用于引物退火温度优化。- 温度均匀性约 ±0.3 至 0.5 °C。- 程序存储和 USB 运行日志导出。## 技术参数有哪些？典型的终点法 PCR 热循环仪配置：模块规格为 96 x 0.2 mL, 384-well or 0.5 mL options；温度范围为 4-99 °C；最大升降温速率为 3-5 °C per second；温度均匀性为 ±0.3-0.5 °C at 72 °C；温度准确度为 ±0.2 °C；梯度范围为 30-99 °C, up to 12 rows。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？终点法 PCR 热循环仪主要用于常规靶标扩增、菌落和克隆筛选、测序模板制备、限制性酶切基因分型。在更广泛的 PCR 仪类别中，实验室还将其用于基因表达分析和转录本定量、临床和食品样品中的病原体检测、基因分型和突变筛查。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 13485 manufacturing、MIQE guidelines、CLSI MM03-A2、CLSI MM06-A2、IEC 61010-1、IVDR (EU) 2017/746。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 test report；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。扩增前和扩增后的操作应在不同区域进行，并使用专用移液器和滤芯吸头，因为扩增产物残留是假阳性的主要原因。用新鲜次氯酸盐或经验证的除污剂清洁台面和设备，条件允许时使用紫外照射，并经常更换手套。每年用标准温度计和染料板校准加热模块温度和光学通道，并检查整块模块的均匀性。每次运行用阳性、阴性对照和标准曲线验证性能，并记录 Ct 值、扩增效率和熔解温度。引物和探针应按推荐温度分装小份保存，避免反复冻融，荧光探针需避光。## 如何选择合适的终点法 PCR 热循环仪？当仅需定性检测且已有凝胶或毛细管检测条件时，选择终点法热循环仪。比较模块规格、升降温速率、均匀性和梯度选项，并确认热盖压力适合所用管或板。询价时请注明管型、板式、程序容量以及是否需要在方法开发时使用梯度模块。### 与其他 PCR 仪型号相比如何？首先确定需要定性检测、相对或绝对定量还是序列变异区分，这决定在终点法热循环仪与实时荧光和熔解分析系统之间的选择。其次确定光学通道数量，多重检测组合需要二至六个通道及匹配的滤光片组。通量取决于板式：96 孔适合多数实验室，384 孔板和自动化适合高通量筛查。检查加热模块类型、最大升降温速率、温度均匀性和梯度功能，这些有助于优化新引物组。用于现场检测时，应考虑体积、供电方式和环境温度耐受性。确认分析软件、导出格式、引物探针支持情况以及质量体系所需的验证文件。