流式细胞术试剂

流式细胞术试剂的工作原理是什么？流式细胞术试剂使细胞特性以光学信号的形式可被检测。偶联了 FITC、PE、APC 或串联染料和聚合物染料等荧光素的单克隆抗体结合特定抗原，激光激发的荧光强度与抗原密度成正比。核酸染料和胺反应性染料可区分活细胞与死细胞，因为膜受损的细胞会摄入 DNA 染料或暴露更多的胺基。校准和补偿微球通过捕获基团结合抗体，或携带确定的荧光素含量，为补偿矩阵和标准化提供一致的阳性和阴性群体。固定通常采用甲醛使蛋白交联，而用去污剂或醇类破膜可使抗体到达胞内或核内靶点。裂解液通过渗透压或氯化铵裂解去除红细胞，同时保留白细胞的散射特性。## 流式细胞术试剂有哪些型号？- 荧光素偶联单克隆抗体检测组合试剂：荧光素偶联单克隆抗体是与荧光染料共价连接的纯化特异性抗体克隆，用于通过流式细胞术检测细胞表面或胞内抗原，构成从 4 色临床检测管到 30 色科研设计的免疫表型分析检测组合的核心。- 可固定活性染料试剂：可固定活性染料是胺反应性荧光染料，共价标记膜受损的死细胞，并能耐受固定和破膜。- 补偿与校准微球试剂：补偿和校准微球是均一的聚苯乙烯微球，用于设置补偿矩阵和监测流式细胞仪性能。- 固定与破膜缓冲液试剂：固定和破膜缓冲液试剂可保存细胞结构并打开细胞膜，使抗体能够到达胞内、胞质或核内抗原。- 红细胞裂解试剂：红细胞裂解试剂可选择性裂解全血或骨髓中的红细胞，同时保留白细胞的散射特性和抗原表达，用于免疫表型分析的免洗或洗涤方案，剂型包括氯化铵类裂解缓冲液和含固定剂的裂解固定配方。## 如何选择合适的型号？应根据仪器的激光器和滤光片选择试剂，因为荧光素必须能被所用配置激发和检测。将亮度高的荧光素分配给低密度抗原，亮度低的分配给丰富抗原，并避免串联染料之间的光谱重叠。确认抗体克隆、种属反应性以及针对流式细胞术的已验证应用。对于胞内或磷酸化靶点，应选择相容的固定和破膜缓冲液。每个检测组合都应包含活性染料，并为每种荧光素选用相容的补偿微球。核查批间一致性文件、2 至 8 摄氏度的储存条件、有效期，以及受监管检测所需的散装或冻干规格的供应情况。应在自己的细胞中对每种抗体进行滴定，以确定最佳染色浓度。## 流式细胞术试剂用于哪些领域？流式细胞术试剂广泛用于免疫表型分析检测组合、活/死细胞鉴别、仪器补偿和质控、胞内细胞因子和转录因子染色、全血白细胞分析、细胞治疗产品表征。## 适用哪些标准与认证？流式细胞术试剂相关工作通常依据 CLSI H62、CLSI H43、ISO 20391-2、ISO 13485 (IVD reagent manufacturing)、EU IVDR 2017/746、ISAC MIFlowCyt。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？抗体和染料应在 2 至 8 摄氏度避光储存，切勿冷冻串联染料，否则会降解并造成溢出。每批新抗体都应进行滴定，并在实验记录中登记批号。必要时使用 Fc 受体封闭，设门时应包含荧光减一对照、同型或生物学对照。应新鲜配制甲醛溶液，并针对每个表位验证固定时间。含叠氮化物的缓冲液和裂解试剂应依据当地化学品法规处置，因为叠氮化钠可在管道中形成爆炸性金属叠氮化物。用于受监管检测时，应采购带分析证书的试剂，更换供应商或克隆时应重新验证检测组合。