补偿与校准微球试剂

什么是补偿与校准微球试剂？补偿和校准微球是均一的聚苯乙烯微球，用于设置补偿矩阵和监测流式细胞仪性能。抗体捕获微球可为任何偶联物提供明亮的阳性和阴性群体，荧光校准微球则用于验证激光对准、灵敏度和定量。## 概述

补偿微球是直径通常为 3 至 8 微米的聚苯乙烯微球，表面包被有抗免疫球蛋白捕获抗体，可结合相应物种的任何偶联抗体，提供一个亮度一致的阳性群体和一个阴性群体。这避免了消耗珍贵细胞来制作单染对照，并可对串联染料进行准确补偿。校准微球则不同：它们携带固定的荧光素含量，例如 3 至 6 个峰的微球组，用于每日质控激光对准、检测器线性和灵敏度，或为将荧光映射为等效可溶性荧光素分子数的 MESF 微球。已知浓度的计数微球（供应浓度约为每微升 1,000 个）可根据微球与细胞的事件比例计算绝对细胞计数。微球以滴瓶或小瓶供应，在 2 至 8 摄氏度避光储存。## 工作原理是什么？流式细胞术试剂使细胞特性以光学信号的形式可被检测。偶联了 FITC、PE、APC 或串联染料和聚合物染料等荧光素的单克隆抗体结合特定抗原，激光激发的荧光强度与抗原密度成正比。核酸染料和胺反应性染料可区分活细胞与死细胞，因为膜受损的细胞会摄入 DNA 染料或暴露更多的胺基。校准和补偿微球通过捕获基团结合抗体，或携带确定的荧光素含量，为补偿矩阵和标准化提供一致的阳性和阴性群体。固定通常采用甲醛使蛋白交联，而用去污剂或醇类破膜可使抗体到达胞内或核内靶点。裂解液通过渗透压或氯化铵裂解去除红细胞，同时保留白细胞的散射特性。## 主要特点有哪些？- 抗免疫球蛋白捕获微球可结合任何匹配物种的偶联抗体 - 独立的阳性和阴性微球群体，提供清晰的补偿对照 - 多峰荧光微球检查激光对准、线性和灵敏度 - MESF 微球将荧光强度换算为等效荧光素分子数 - 已知浓度的计数微球可用于计算绝对细胞计数 - 适用于串联染料，无需消耗珍贵的细胞样品

技术参数有哪些？典型的补偿与校准微球试剂配置：微球材质为 Polystyrene microspheres；微球直径为 Approx. 3–8 µm；捕获反应性为 Mouse, rat, hamster or human Ig (kit dependent)；微球浓度为 Approx. 1 × 10^6 beads/mL (compensation); approx. 1,000 beads/µL (counting)；每套校准微球峰数为 3–8 peaks；微球群体变异系数为 Below 3% (typical)。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？补偿与校准微球试剂主要用于补偿矩阵设置、流式细胞仪每日质控、绝对细胞计数、抗原密度的 MESF 定量、跨站点仪器标准化。在更广泛的流式细胞术试剂类别中，实验室还将其用于免疫表型分析检测组合、活/死细胞鉴别、仪器补偿和质控。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 CLSI H62、CLSI H43、ISO 20391-2、ISO 13485 (IVD reagent manufacturing)、EU IVDR 2017/746、ISAC MIFlowCyt。本型号的认证候选包括 ISO 13485 manufacturing、CE-IVD marking for selected products、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。抗体和染料应在 2 至 8 摄氏度避光储存，切勿冷冻串联染料，否则会降解并造成溢出。每批新抗体都应进行滴定，并在实验记录中登记批号。必要时使用 Fc 受体封闭，设门时应包含荧光减一对照、同型或生物学对照。应新鲜配制甲醛溶液，并针对每个表位验证固定时间。含叠氮化物的缓冲液和裂解试剂应依据当地化学品法规处置，因为叠氮化钠可在管道中形成爆炸性金属叠氮化物。用于受监管检测时，应采购带分析证书的试剂，更换供应商或克隆时应重新验证检测组合。## 如何选择合适的补偿与校准微球试剂？补偿选用捕获微球，每日质控选用固定峰荧光微球，定量选用 MESF 微球，绝对计数选用计数微球。微球类型必须与抗体物种和仪器激光器匹配。询价时应说明功能、种属反应性、峰数、微球浓度和包装规格。### 与其他流式细胞术试剂型号相比如何？应根据仪器的激光器和滤光片选择试剂，因为荧光素必须能被所用配置激发和检测。将亮度高的荧光素分配给低密度抗原，亮度低的分配给丰富抗原，并避免串联染料之间的光谱重叠。确认抗体克隆、种属反应性以及针对流式细胞术的已验证应用。对于胞内或磷酸化靶点，应选择相容的固定和破膜缓冲液。每个检测组合都应包含活性染料，并为每种荧光素选用相容的补偿微球。核查批间一致性文件、2 至 8 摄氏度的储存条件、有效期，以及受监管检测所需的散装或冻干规格的供应情况。应在自己的细胞中对每种抗体进行滴定，以确定最佳染色浓度。