流式细胞仪

流式细胞仪的工作原理是什么？流式细胞仪利用鞘液将样品流体动力学聚焦为细窄的核心液流，使细胞逐个通过激光检测点。散射光分别在小角度（前向散射，与细胞大小相关）和 90 度方向（侧向散射，与颗粒度相关）收集。荧光素由激光激发，常用波长为 405、488、561 和 640 nm，发射光经二向色滤光片和带通滤光片分光后送至光电倍增管或光电二极管。传统仪器为每种荧光素分配一个检测器并应用补偿矩阵，而光谱型仪器则采集完整发射光谱并通过数学方法解混。电子系统对脉冲高度、面积和宽度进行数字化，软件以列表模式记录 FCS 文件，用于设门和统计分析。## 流式细胞仪有哪些型号？- 台式流式细胞仪：台式流式细胞仪是紧凑型滤光片式分析仪，配备一至三根激光器和约 4 至 10 个荧光通道。- 高参数科研流式细胞仪：高参数科研流式细胞仪是配备四至七根激光器和 18 至 30 个及以上荧光检测器的模块化分析仪，适用于深度免疫表型分析、稀有事件分析和复杂检测组合，这类应用更看重灵敏度和灵活的光学配置，而非占地面积。- 光谱流式细胞仪：光谱流式细胞仪通过检测器阵列记录每个细胞的完整荧光发射光谱，并以数学方法解混重叠染料。- 声波聚焦流式细胞仪：声波聚焦流式细胞仪利用超声驻波在激光检测前将细胞定位于液流中心，可在不单纯依赖鞘液流体动力学聚焦的情况下实现高样品流速、较低堵塞风险，并对稀释或小体积样品进行准确计数。- 紧凑型个人流式细胞仪：紧凑型个人流式细胞仪是小型、低维护的分析仪，配备一至两根激光器和三至六个荧光通道，使独立实验室和教学环境无需专门的流式平台即可方便地开展活率、GFP、凋亡和简单表型分析检测。## 如何选择合适的型号？选择流式细胞仪应综合考虑检测组合复杂度、灵敏度和工作流程。首先确定同时检测的最大颜色数，再据此选择激光器和检测器数量；传统的滤光片型系统适合 4 至 12 色的简单应用，而光谱型系统在 20 色以上时更便于组合设计。核查对弱阳性群体的分辨能力、小颗粒检测能力和事件速率，通常为每秒 10,000 至 100,000 个事件。考虑占地面积，判断需要紧凑型个人分析仪还是完整的科研平台，以及是否需要声波聚焦或板式进样器来提升通量。确认软件具备补偿或解混、批量分析和用户权限控制功能。用于临床时，应确认供应商可提供 IVD 文件、校准微球和经验证的质控流程。## 流式细胞仪用于哪些领域？流式细胞仪广泛用于淋巴细胞亚群免疫表型分析、CD34 干细胞计数、细胞周期和凋亡分析、白血病和淋巴瘤诊断研究、细胞株和 CAR-T 表征、细菌和微生物计数。## 适用哪些标准与认证？流式细胞仪相关工作通常依据 CLSI H62、CLSI H43、ISO 20391-1、IEC 61010-1、IEC 61010-2-101、IEC 60825-1、ISAC FCS 3.1。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？流式细胞仪应安装在无振动的工作台上，电源稳定，环境温度在 15 至 30 摄氏度之间，并为可能具有生物危害的废液配备处理措施，通常采用次氯酸钠处理。每日使用荧光微球进行质控，验证激光对准、灵敏度和变异系数，并以 Levey-Jennings 形式记录检测器电压。每日和每周清洁液路以避免堵塞，按计划更换鞘液过滤器和管路。激光功率和光路对准至少每年由经培训的维修人员检查一次。在 ISO 15189 或 GLP 下工作的实验室应启用审计追踪、电子签名和经验证的软件更新。