自动核酸定量与均一化工作站

什么是自动核酸定量与均一化工作站？自动测量浓度并将每份样品稀释至目标值的机器人平台，直接产出可供 qPCR 或测序使用的均一化板。在高通量流程中省去人工移液步骤。## 概述

均一化工作站将板式读数仪或荧光模块与机器人移液臂、放置样品板、稀释板、吸头和试剂槽的工作台以及将测得浓度与稀释体积关联的软件组合起来。测量后，软件计算每孔达到目标浓度或转移固定核酸质量所需的样品体积和稀释液体积，然后执行转移并记录实际使用体积。工作体积通常为 5 至 50 µL，准确性取决于针对小体积校准的吸头式或注射器式移液模块以及对粘稠溶液正确设置的液类参数。系统通常支持 96 和 384 孔板，可与实验室信息系统集成并导出工作列表，因此在每天均一化数百份样品的基因分型和测序文库流程中处于核心位置。## 工作原理是什么？主要有两类测量原理。吸光度分析使用 1 mm 或 0.5 mm 光程的微量比色池，在核酸强烈吸收的 260 nm 处读数，并将结果换算为标准 10 mm 光程。A260 为 1.0 约相当于双链 DNA 50 µg/mL、单链 DNA 33 µg/mL 和 RNA 40 µg/mL，260/280 与 260/230 比值可指示蛋白质或盐类污染。荧光法使用与双链 DNA 或总 RNA 特异性结合的染料，信号仅来自目标分子，因此对蛋白质、盐类和游离核苷酸的耐受性更好。毛细管电泳在筛分聚合物中分离片段，给出以碱基对表示的片段长度和摩尔浓度。自动工作站将测量与移液结合，可将样品稀释至目标浓度。## 主要特点有哪些？- 集成浓度测量与稀释。- 机器人移液，工作体积 5 至 50 µL。- 软件计算每孔所需的样品和稀释液体积。- 支持固定浓度或固定质量均一化。- 兼容 96 和 384 孔板。- 可导出工作列表至实验室信息系统。## 技术参数有哪些？典型的自动核酸定量与均一化工作站配置：板规格为 96 and 384 well；工作体积为 5-50 µL；移液准确度为 CV below 5 percent at 5 µL；测量模块为 Fluorescence or absorbance plate reader；工作台位为 6-12 positions for plates and reservoirs；均一化模式为 Target concentration or fixed mass transfer。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？自动核酸定量与均一化工作站主要用于基因分型板均一化、测序文库均一化和混样、qPCR 组合模板制备、大规模动植物育种群体。在更广泛的核酸分析类别中，实验室还将其用于二代测序文库质量控制、qPCR 前模板定量、质粒和寡核苷酸质量检查。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20395、ISO 13485 manufacturing、MIQE guidelines、CLSI MM06-A2、IEC 61010-1、IVDR (EU) 2017/746。本型号的认证候选包括 CE、ISO 13485 manufacturing、IEC 61010-1 test report；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应使用与样品相同的缓冲液进行空白校准，因为不同缓冲液的吸光度不同，含胍盐或 EDTA 的洗脱液会给出误导性比值。保持测量基座清洁，并在样品之间擦拭以避免残留，同时定期用参考标准品检查微量测量的准确性。荧光检测需要新鲜配制的标准品，染料试剂需避光，且基于染料的浓度值取决于检测化学体系，因此不应比较不同试剂盒的结果。进行片段分析时，应严格按供应商要求制备样品和分子量标记，因为离子强度会影响进样。洗脱后的核酸应低温保存，避免反复冻融，并为每份样品记录浓度、比值和检测方法。## 如何选择合适的自动核酸定量与均一化工作站？当每天需要均一化数百份样品且人工稀释成为瓶颈时，选择该工作站。比较最小转移体积下的移液准确度、工作台容量、支持的板型以及是否同时支持按浓度和按质量均一化。确认工作列表和报告格式，并将吸头成本和服务合同计入预算。### 与其他核酸分析型号相比如何？根据所需的选择性选择方法。吸光度法快速、成本低，足以满足常规质粒或 PCR 检查，但无法区分 DNA 与 RNA，且受蛋白质、酚类和盐类影响。荧光染料对双链 DNA 或 RNA 具有选择性，最低可检测数皮克，适合测序文库和产量很低的样品。毛细管电泳可提供分光光度计无法给出的片段大小和完整性信息，对文库插入片段大小和 RNA 完整性尤为重要。随后由通量决定在单管设备、微孔板读数仪和兼具测量与均一化功能的自动工作站之间选择。检查最小样品体积、检测限、线性范围、所需标准品以及数据系统可接受的导出格式。