核酸定量用荧光微孔板读数仪

什么是核酸定量用荧光微孔板读数仪？使用染料化学体系在 96 或 384 孔板中定量 DNA 或 RNA 的读数仪，通量高且样品消耗少。适合每天均一化数百份样品的实验室。## 概述

荧光板读数仪在多孔板中测量基于染料的核酸检测，采用顶部或底部光路、单色器或滤光片组，并用氙闪灯或 LED 激发配合光电倍增管检测。标准曲线与样品在同一块板中制备，软件插值计算浓度、标记超出线性范围的孔并生成板图。使用 96 或 384 孔板时，一次运行数分钟内可定量数百份样品，每孔消耗 2 至 20 µL 样品，适合为 qPCR 组合自动均一化文库或模板。灵敏度与单管荧光计相当，由于激发和发射滤光片与染料匹配，相邻孔之间的串扰较低。部分机型还提供吸光度模式用于 A260 测量或显色检测。## 工作原理是什么？主要有两类测量原理。吸光度分析使用 1 mm 或 0.5 mm 光程的微量比色池，在核酸强烈吸收的 260 nm 处读数，并将结果换算为标准 10 mm 光程。A260 为 1.0 约相当于双链 DNA 50 µg/mL、单链 DNA 33 µg/mL 和 RNA 40 µg/mL，260/280 与 260/230 比值可指示蛋白质或盐类污染。荧光法使用与双链 DNA 或总 RNA 特异性结合的染料，信号仅来自目标分子，因此对蛋白质、盐类和游离核苷酸的耐受性更好。毛细管电泳在筛分聚合物中分离片段，给出以碱基对表示的片段长度和摩尔浓度。自动工作站将测量与移液结合，可将样品稀释至目标浓度。## 主要特点有哪些？- 96 或 384 孔规格，每次运行可测数百份样品。- 滤光片或单色器光路，匹配常用染料。- 标准品与样品在同一块板上测量。- 每孔样品消耗 2 至 20 µL。- 软件支持标准曲线拟合和超范围标记。- 可选吸光度模式，用于 A260 或显色检测。## 技术参数有哪些？典型的核酸定量用荧光微孔板读数仪配置：板规格为 96 and 384 well；激发波长范围为 400-700 nm, filter or monochromator；发射波长范围为 420-760 nm；检测限为 0.2-1 ng/mL with high-sensitivity kit；样品体积为 2-20 µL per well；通量为 96 wells in 1-3 min。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？核酸定量用荧光微孔板读数仪主要用于 qPCR 模板批量均一化、测序文库混合前定量、数百份提取产物的筛检、植物和种子基因分型样品检查。在更广泛的核酸分析类别中，实验室还将其用于二代测序文库质量控制、qPCR 前模板定量、质粒和寡核苷酸质量检查。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20395、ISO 13485 manufacturing、MIQE guidelines、CLSI MM06-A2、IEC 61010-1、IVDR (EU) 2017/746。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 test report；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应使用与样品相同的缓冲液进行空白校准，因为不同缓冲液的吸光度不同，含胍盐或 EDTA 的洗脱液会给出误导性比值。保持测量基座清洁，并在样品之间擦拭以避免残留，同时定期用参考标准品检查微量测量的准确性。荧光检测需要新鲜配制的标准品，染料试剂需避光，且基于染料的浓度值取决于检测化学体系，因此不应比较不同试剂盒的结果。进行片段分析时，应严格按供应商要求制备样品和分子量标记，因为离子强度会影响进样。洗脱后的核酸应低温保存，避免反复冻融，并为每份样品记录浓度、比值和检测方法。## 如何选择合适的核酸定量用荧光微孔板读数仪？当每天需要定量数百份样品且已有板式自动化流程时，选择板式读数仪。比较滤光片或单色器的灵活性、检测限和串扰表现，并确认软件导出的浓度格式可用于均一化流程。检查适用的板型以及是否需要吸光度模式。### 与其他核酸分析型号相比如何？根据所需的选择性选择方法。吸光度法快速、成本低，足以满足常规质粒或 PCR 检查，但无法区分 DNA 与 RNA，且受蛋白质、酚类和盐类影响。荧光染料对双链 DNA 或 RNA 具有选择性，最低可检测数皮克，适合测序文库和产量很低的样品。毛细管电泳可提供分光光度计无法给出的片段大小和完整性信息，对文库插入片段大小和 RNA 完整性尤为重要。随后由通量决定在单管设备、微孔板读数仪和兼具测量与均一化功能的自动工作站之间选择。检查最小样品体积、检测限、线性范围、所需标准品以及数据系统可接受的导出格式。