垂直电泳

垂直电泳的工作原理是什么？在垂直系统中，聚丙烯酰胺凝胶灌制在由间隔条隔开的两块玻璃板之间，安装后其上端浸入上缓冲液腔，下端浸入下缓冲液腔。两个腔室之间的电压驱动带电分子向下穿过凝胶。聚丙烯酰胺形成的网孔比琼脂糖更紧密均匀，孔径由丙烯酰胺总浓度和交联剂比例决定，因此相差数千道尔顿的蛋白质或仅差一个核苷酸的片段也可分辨。在不连续 SDS-PAGE 中，浓缩胶先将样品压缩成锐利的条带，再进入分离胶。关键部件包括玻璃板、间隔条、梳子、夹具、密封垫、缓冲液腔，以及带走焦耳热的冷却芯或冷却板。## 垂直电泳有哪些型号？- 蛋白质微型垂直凝胶电泳系统：一种紧凑型垂直装置，适用于 8 x 7 cm 聚丙烯酰胺凝胶，可在 40–90 分钟内运行一至四块凝胶。- 中型垂直凝胶电泳系统：一种适用于 16 x 16 cm 凝胶的垂直装置，分离路径约为微型凝胶的两倍。- 用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统：一种适用于 20 x 20 cm 凝胶的大型垂直装置，通常带冷却回路，用于双向电泳的第二向和复杂蛋白质组的高分辨率分离。- DNA 测序胶电泳装置：一种带长而薄玻璃板的垂直装置，板尺寸通常为 33 x 42 cm 或更长，可在变性聚丙烯酰胺凝胶上分辨相差一个核苷酸的核酸片段。- 带灌胶器的多胶垂直电泳槽：一种可在单个腔室中运行多达六块或十二块凝胶的垂直电泳槽，配有多胶灌胶器用于批量制备。## 如何选择合适的型号？应根据应用确定凝胶规格。约 8 x 7 cm 的微型凝胶快速经济，适用于常规蛋白检查和 western blot 前处理。中型和大型凝胶为复杂样品提供更长的分离路径，20 x 20 cm 的玻璃板是双向电泳的标准尺寸。带长而薄玻璃板的测序装置适用于单碱基分辨率的核酸工作。应考虑通量、是否需要同时灌制和运行多块凝胶，以及长时间高压运行是否需要冷却。检查 0.75 至 1.5 mm 的凝胶厚度选项、梳子孔数、与预制胶的兼容性，以及玻璃板和间隔条的质量，因为玻璃破损会造成漏液。电源应满足电压和电流需求，多胶运行时尤其如此。## 垂直电泳用于哪些领域？垂直电泳广泛用于 SDS-PAGE 蛋白质分离、天然 PAGE 和活性染色胶、双向电泳、DNA 测序胶、Western blot 样品前处理。## 适用哪些标准与认证？垂直电泳相关工作通常依据 IEC 61010-1、IEC 61326-1、Ph. Eur. 2.2.31、USP <1053>、ISO 17025。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？每次灌胶前应在干净平整的表面上组装玻璃板，并检查密封垫和间隔条是否损坏，因为漏液会毁掉凝胶并污染下缓冲液腔。丙烯酰胺单体具有神经毒性，应佩戴手套，并尽可能使用已聚合的凝胶或预制胶。使用新鲜的过硫酸铵和 TEMED 以获得可重复的聚合。缓冲液腔应加至标记液位，长时间运行时应装上冷却芯。用无磨损性的洗涤剂清洁玻璃板，切勿用刀片分离。电气安全遵循 IEC 61010-1，配联锁盖和绝缘引线。记录凝胶浓度、缓冲液批号和运行条件，并用分子量标准验证性能。