用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统

什么是用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统？一种适用于 20 x 20 cm 凝胶的大型垂直装置，通常带冷却回路，用于双向电泳的第二向和复杂蛋白质组的高分辨率分离。一次可运行一至十二块凝胶。## 概述

双向电泳首先在固定化 pH 梯度胶条上按等电点分离蛋白质，然后在 SDS-PAGE 平板胶上按分子量分离。第二向需要大而均匀的凝胶，通常为 20 x 20 cm 或 24 x 20 cm，厚度 1.0 mm，以便分辨数千个蛋白点。因此，大型系统包括带缓冲液循环冷却回路的电泳槽，可将温度控制在 1 °C 以内；兼容梯度混合器的高型灌胶盒；以及可容纳六块或十二块凝胶的架子。运行在较低的恒定电流下持续 4–16 小时，以限制发热。由于凝胶间蛋白点的匹配依赖于一致的迁移，制作精良的玻璃板、可重复的灌胶和稳定的温度至关重要。用户包括蛋白质组学核心平台和生物标志物发现团队。## 工作原理是什么？在垂直系统中，聚丙烯酰胺凝胶灌制在由间隔条隔开的两块玻璃板之间，安装后其上端浸入上缓冲液腔，下端浸入下缓冲液腔。两个腔室之间的电压驱动带电分子向下穿过凝胶。聚丙烯酰胺形成的网孔比琼脂糖更紧密均匀，孔径由丙烯酰胺总浓度和交联剂比例决定，因此相差数千道尔顿的蛋白质或仅差一个核苷酸的片段也可分辨。在不连续 SDS-PAGE 中，浓缩胶先将样品压缩成锐利的条带，再进入分离胶。关键部件包括玻璃板、间隔条、梳子、夹具、密封垫、缓冲液腔，以及带走焦耳热的冷却芯或冷却板。## 主要特点有哪些？- 20 x 20 cm 或更大的凝胶支持复杂蛋白质组的高分辨率第二向分离 - 循环冷却回路在长时间运行中将凝胶温度稳定在约 1 °C 以内 - 架子可容纳六至十二块凝胶并行运行，支持可重复的蛋白点匹配 - 兼容梯度混合器的灌胶盒可制备均匀的 8–16% 或 10–20% 凝胶 - 兼容胶条架的玻璃板可直接放置固定化 pH 梯度胶条 - 不锈钢或聚碳酸酯槽体在反复使用中耐缓冲液和清洁化学品

技术参数有哪些？典型的用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统配置：凝胶尺寸（宽 x 长）为 20 x 20 cm or 24 x 20 cm；凝胶厚度为 1.0 mm (0.75–1.5 mm options)；每次运行凝胶数为 1–12；缓冲液体积为 approx. 6–20 L depending on rack；温度控制为 10–25 °C, approx. ±1 °C with external circulator；最大电压为 600 V DC。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统主要用于双向蛋白质组学、生物标志物发现、差异蛋白表达研究、复杂蛋白裂解液比较。在更广泛的垂直电泳类别中，实验室还将其用于 SDS-PAGE 蛋白质分离、天然 PAGE 和活性染色胶、双向电泳。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 IEC 61010-1、IEC 61326-1、Ph. Eur. 2.2.31、USP <1053>、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、RoHS；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。每次灌胶前应在干净平整的表面上组装玻璃板，并检查密封垫和间隔条是否损坏，因为漏液会毁掉凝胶并污染下缓冲液腔。丙烯酰胺单体具有神经毒性，应佩戴手套，并尽可能使用已聚合的凝胶或预制胶。使用新鲜的过硫酸铵和 TEMED 以获得可重复的聚合。缓冲液腔应加至标记液位，长时间运行时应装上冷却芯。用无磨损性的洗涤剂清洁玻璃板，切勿用刀片分离。电气安全遵循 IEC 61010-1，配联锁盖和绝缘引线。记录凝胶浓度、缓冲液批号和运行条件，并用分子量标准验证性能。## 如何选择合适的用于 2D-PAGE 的大型垂直电泳系统？对于 2D-PAGE 和高分辨率蛋白质组工作，蛋白点的重现性比速度更重要，应选择大型系统。它需要循环制冷机、更多缓冲液，以及电压足够且能低电流控制的电源。询价时应注明凝胶尺寸和数量、冷却能力、IPG 胶条长度和灌胶容量。### 与其他垂直电泳型号相比如何？应根据应用确定凝胶规格。约 8 x 7 cm 的微型凝胶快速经济，适用于常规蛋白检查和 western blot 前处理。中型和大型凝胶为复杂样品提供更长的分离路径，20 x 20 cm 的玻璃板是双向电泳的标准尺寸。带长而薄玻璃板的测序装置适用于单碱基分辨率的核酸工作。应考虑通量、是否需要同时灌制和运行多块凝胶，以及长时间高压运行是否需要冷却。检查 0.75 至 1.5 mm 的凝胶厚度选项、梳子孔数、与预制胶的兼容性，以及玻璃板和间隔条的质量，因为玻璃破损会造成漏液。电源应满足电压和电流需求，多胶运行时尤其如此。