荧光显微镜

荧光显微镜的工作原理是什么？荧光显微镜用含激发滤光片、二向色镜和发射滤光片的滤光块，以选定的激发波长照明样品。样品中的荧光团吸收激发光并在较长波长处发射。二向色镜把激发光反射到样品上并让发射光透过至物镜和检测器，因此大部分背景照明被排除。样品因而在暗背景上显得明亮，具有高反差和特异性。多个滤光片组可依次成像不同荧光团，激发与发射波段的选择须避免通道间重叠。明亮光源、高效滤光片和高数值孔径物镜决定灵敏度。## 荧光显微镜有哪些型号？- 正置荧光显微镜：正置荧光显微镜从上方通过物镜照明样品。- 倒置荧光显微镜：倒置荧光显微镜从下方透过培养器皿底部照明和观察活细胞。- LED 荧光显微镜：LED 荧光显微镜使用发光二极管而非弧光灯作为激发光源。- 共聚焦激光扫描显微镜：共聚焦激光扫描显微镜使用聚焦激光和针孔排除离焦光，获得清晰的光学切片。- 体视荧光显微镜：体视荧光显微镜将低倍体视观察与荧光激发相结合。## 如何选择合适的型号？当需要通过荧光标记或自发荧光检测特定分子时选择荧光显微镜。使滤光片组与所用荧光团匹配，例如用于细胞核的 DAPI 或绿色发射的 FITC，并确认激发光源覆盖所有所需波长。在适合玻片和切片的倒置或正置配置之间选择：玻片和切片用正置，培养皿中的活细胞用倒置。需要光学切片和三维成像时应使用共聚焦系统。在稳定性和低运行成本的 LED 光源与极高强度的弧光灯之间权衡。检查物镜的数值孔径、透射率和校正，以及相机在所用发射波长的灵敏度。## 荧光显微镜用于哪些领域？荧光显微镜广泛用于免疫荧光和细胞生物学、荧光原位杂交、微生物学和活性染色、材料和法证荧光检查。## 适用哪些标准与认证？荧光显微镜相关工作通常依据 ISO 8036、ISO 19012-1、ISO 9345-1、ISO 8255-1、IEC 61010-1。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？保护样品免受不必要的光照以减少光漂白，并使用能给出足够信号的最低激发强度。选择与荧光团匹配的滤光片组，并避免通道间光谱重叠。保持滤光片、二向色镜和物镜清洁，因为污染会产生背景荧光和散射。汞灯和氙灯需要预热、一致的校准和谨慎处置，而发光二极管稳定且寿命长。成像前用空白玻片核查背景和均匀性。将激发和发射设置随图像记录以保证可重复性，并为定量工作维护相机和软件。