正置荧光显微镜

什么是正置荧光显微镜？正置荧光显微镜从上方通过物镜照明样品。它是用于玻片上荧光标记组织切片、涂片和固定细胞的标准配置。## 概述

正置荧光显微镜采用落射照明，即激发光通过物镜到达样品，发射光沿同一物镜返回。这种设计使物镜靠近样品，获得高数值孔径和分辨率。玻片置于聚光镜位置上方的机械载物台上，并可切换透射照明以进行明场比较。转换盘中的多个滤光块可快速切换荧光团，三目观察头可接相机。弧光灯或发光二极管提供激发。该配置非常适合固定在平面上的薄样品、切片和涂片。## 工作原理是什么？荧光显微镜用含激发滤光片、二向色镜和发射滤光片的滤光块，以选定的激发波长照明样品。样品中的荧光团吸收激发光并在较长波长处发射。二向色镜把激发光反射到样品上并让发射光透过至物镜和检测器，因此大部分背景照明被排除。样品因而在暗背景上显得明亮，具有高反差和特异性。多个滤光片组可依次成像不同荧光团，激发与发射波段的选择须避免通道间重叠。明亮光源、高效滤光片和高数值孔径物镜决定灵敏度。## 主要特点有哪些？- 通过物镜的落射照明 - 可装多个荧光滤光块的转换盘 - 用于制备玻片的机械载物台 - 三目观察头可接相机 - 可选透射光用于明场比较

技术参数有哪些？典型的正置荧光显微镜配置：光学系统为 Infinite corrected, fluorescence；滤光块为 DAPI, FITC, TRITC, 4-position turret；光源为 100 W mercury lamp or LED；物镜为 10×, 20×, 40×, 100× semi-apochromat；目镜为 10× widefield；载物台为 Mechanical, 140 × 140 mm。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？正置荧光显微镜主要用于组织切片免疫荧光、荧光原位杂交、涂片和细胞学荧光、微生物荧光染色。在更广泛的荧光显微镜类别中，实验室还将其用于免疫荧光和细胞生物学、荧光原位杂交、微生物学和活性染色。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 8036、ISO 19012-1、ISO 9345-1、ISO 8255-1、IEC 61010-1。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。保护样品免受不必要的光照以减少光漂白，并使用能给出足够信号的最低激发强度。选择与荧光团匹配的滤光片组，并避免通道间光谱重叠。保持滤光片、二向色镜和物镜清洁，因为污染会产生背景荧光和散射。汞灯和氙灯需要预热、一致的校准和谨慎处置，而发光二极管稳定且寿命长。成像前用空白玻片核查背景和均匀性。将激发和发射设置随图像记录以保证可重复性，并为定量工作维护相机和软件。## 如何选择合适的正置荧光显微镜？当样品为玻片上的薄制备样品时选择正置荧光显微镜。使滤光块与荧光团匹配，并确认光源覆盖所有所需波长。选择在发射波长处具有高数值孔径和良好透射的物镜，以及灵敏度足以满足信号水平的相机。若需明场比较，应增加透射照明。### 与其他荧光显微镜型号相比如何？当需要通过荧光标记或自发荧光检测特定分子时选择荧光显微镜。使滤光片组与所用荧光团匹配，例如用于细胞核的 DAPI 或绿色发射的 FITC，并确认激发光源覆盖所有所需波长。在适合玻片和切片的倒置或正置配置之间选择：玻片和切片用正置，培养皿中的活细胞用倒置。需要光学切片和三维成像时应使用共聚焦系统。在稳定性和低运行成本的 LED 光源与极高强度的弧光灯之间权衡。检查物镜的数值孔径、透射率和校正，以及相机在所用发射波长的灵敏度。