倒置荧光显微镜

什么是倒置荧光显微镜？倒置荧光显微镜从下方透过培养器皿底部照明和观察活细胞。它是培养皿、培养瓶和多孔板中活细胞荧光成像的标准配置。## 概述

倒置荧光显微镜将物镜置于载物台下方、照明置于上方，使样品在观察过程中保持在培养器皿中。长工作距离物镜适应塑料底部的厚度，并便于微操作、灌流和温控。落射荧光照明如正置设计一样通过物镜，滤光块提供通道选择。环境舱为活细胞工作维持温度和二氧化碳，电动载物台支持延时成像。该配置对细胞生物学必不可少，因为实验中细胞必须保持存活并处于培养基中。## 工作原理是什么？荧光显微镜用含激发滤光片、二向色镜和发射滤光片的滤光块，以选定的激发波长照明样品。样品中的荧光团吸收激发光并在较长波长处发射。二向色镜把激发光反射到样品上并让发射光透过至物镜和检测器，因此大部分背景照明被排除。样品因而在暗背景上显得明亮，具有高反差和特异性。多个滤光片组可依次成像不同荧光团，激发与发射波段的选择须避免通道间重叠。明亮光源、高效滤光片和高数值孔径物镜决定灵敏度。## 主要特点有哪些？- 物镜置于载物台下方，适合器皿内成像 - 长工作距离物镜 - 落射荧光并配滤光块 - 环境舱维持活细胞条件 - 可选电动载物台用于延时成像

技术参数有哪些？典型的倒置荧光显微镜配置：光学系统为 Infinite corrected, fluorescence；滤光块为 DAPI, FITC, TRITC, 4-position turret；光源为 LED or 100 W mercury lamp；物镜为 4×, 10×, 20×, 40× long working distance；工作距离为 Up to 8 mm；载物台为 Fixed or motorised, for dishes and plates。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？倒置荧光显微镜主要用于活细胞荧光成像、培养细胞延时显微成像、多孔板筛选、微操作和显微注射。在更广泛的荧光显微镜类别中，实验室还将其用于免疫荧光和细胞生物学、荧光原位杂交、微生物学和活性染色。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 8036、ISO 19012-1、ISO 9345-1、ISO 8255-1、IEC 61010-1。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。保护样品免受不必要的光照以减少光漂白，并使用能给出足够信号的最低激发强度。选择与荧光团匹配的滤光片组，并避免通道间光谱重叠。保持滤光片、二向色镜和物镜清洁，因为污染会产生背景荧光和散射。汞灯和氙灯需要预热、一致的校准和谨慎处置，而发光二极管稳定且寿命长。成像前用空白玻片核查背景和均匀性。将激发和发射设置随图像记录以保证可重复性，并为定量工作维护相机和软件。## 如何选择合适的倒置荧光显微镜？当观察器皿中的活细胞或进行延时研究时选择倒置荧光显微镜。确认工作距离和物镜校正适合器皿底部厚度，并且环境控制可维持细胞存活。对于多孔板或多位置成像，应注明电动载物台和自动采集软件。使滤光块与所用荧光团匹配。### 与其他荧光显微镜型号相比如何？当需要通过荧光标记或自发荧光检测特定分子时选择荧光显微镜。使滤光片组与所用荧光团匹配，例如用于细胞核的 DAPI 或绿色发射的 FITC，并确认激发光源覆盖所有所需波长。在适合玻片和切片的倒置或正置配置之间选择：玻片和切片用正置，培养皿中的活细胞用倒置。需要光学切片和三维成像时应使用共聚焦系统。在稳定性和低运行成本的 LED 光源与极高强度的弧光灯之间权衡。检查物镜的数值孔径、透射率和校正，以及相机在所用发射波长的灵敏度。