共聚焦激光扫描显微镜

什么是共聚焦激光扫描显微镜？共聚焦激光扫描显微镜使用聚焦激光和针孔排除离焦光，获得清晰的光学切片。它用于厚样品和活细胞的三维荧光成像。## 概述

共聚焦激光扫描显微镜将激光聚焦到样品上形成衍射极限光斑，并逐点扫描整个视场。发射的荧光返回并通过位于共聚焦平面的针孔，针孔阻挡焦平面上下的光，得到清晰的光学切片。光电倍增管或类似检测器记录每个点的强度，计算机据此构建图像。在连续深度扫描焦平面得到 z 轴序列，可三维重建。多个激光线和检测器可同时或依次成像多种荧光团，针孔大小在分辨率和信号与切片厚度之间权衡。## 工作原理是什么？荧光显微镜用含激发滤光片、二向色镜和发射滤光片的滤光块，以选定的激发波长照明样品。样品中的荧光团吸收激发光并在较长波长处发射。二向色镜把激发光反射到样品上并让发射光透过至物镜和检测器，因此大部分背景照明被排除。样品因而在暗背景上显得明亮，具有高反差和特异性。多个滤光片组可依次成像不同荧光团，激发与发射波段的选择须避免通道间重叠。明亮光源、高效滤光片和高数值孔径物镜决定灵敏度。## 主要特点有哪些？- 激光激发并逐点扫描 - 共聚焦针孔实现光学切片 - z 轴序列采集用于三维重建 - 多激光线和检测器支持多种荧光团 - 软件支持定量和延时成像

技术参数有哪些？典型的共聚焦激光扫描显微镜配置：激光线为 405, 488, 561, 640 nm；扫描分辨率为 Up to 4096 × 4096 pixels；检测器为 Photomultiplier and GaAsP；针孔为 Adjustable, 1 Airy unit typical；z 轴步进为 From 0.1 µm；物镜为 10×, 20×, 40×, 63× oil。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？共聚焦激光扫描显微镜主要用于三维荧光成像、活细胞和延时共聚焦成像、共定位研究、厚组织的光学切片。在更广泛的荧光显微镜类别中，实验室还将其用于免疫荧光和细胞生物学、荧光原位杂交、微生物学和活性染色。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 8036、ISO 19012-1、ISO 9345-1、ISO 8255-1、IEC 61010-1。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。保护样品免受不必要的光照以减少光漂白，并使用能给出足够信号的最低激发强度。选择与荧光团匹配的滤光片组，并避免通道间光谱重叠。保持滤光片、二向色镜和物镜清洁，因为污染会产生背景荧光和散射。汞灯和氙灯需要预热、一致的校准和谨慎处置，而发光二极管稳定且寿命长。成像前用空白玻片核查背景和均匀性。将激发和发射设置随图像记录以保证可重复性，并为定量工作维护相机和软件。## 如何选择合适的共聚焦激光扫描显微镜？当需要光学切片、三维重建或共定位分析时选择共聚焦系统。确认激光线覆盖所用荧光团，并且检测器灵敏度和扫描速度适合样品，尤其是活细胞。考虑针孔控制、z 轴行程以及采集和定量分析软件。使物镜与所需工作距离和校正匹配。### 与其他荧光显微镜型号相比如何？当需要通过荧光标记或自发荧光检测特定分子时选择荧光显微镜。使滤光片组与所用荧光团匹配，例如用于细胞核的 DAPI 或绿色发射的 FITC，并确认激发光源覆盖所有所需波长。在适合玻片和切片的倒置或正置配置之间选择：玻片和切片用正置，培养皿中的活细胞用倒置。需要光学切片和三维成像时应使用共聚焦系统。在稳定性和低运行成本的 LED 光源与极高强度的弧光灯之间权衡。检查物镜的数值孔径、透射率和校正，以及相机在所用发射波长的灵敏度。