多光谱荧光成像系统

什么是多光谱荧光成像系统？多光谱荧光成像系统在每一像素位置采集发射光谱并通过计算分离重叠信号，可在同一张印迹膜或组织切片上分辨五个以上靶标，并减少自发荧光干扰。## 概述

多光谱系统不使用每种染料对应一个带通滤光片的方式，而是采集一系列窄波段图像或整个发射范围。由于每种荧光基团都有特征光谱，自发荧光也有其自身光谱，线性解混即使在发射峰重叠时也能分离各组分的贡献。因此可在同一张膜或切片上使用五到七种标记抗体的组合，并去除会遮盖弱条带的膜或组织自发荧光背景。灵敏度取决于检测器在各波长的量子效率，解混需要从单色对照中采集准确的参考光谱。该方法广泛用于多重免疫组化和定量多重印迹。## 工作原理是什么？成像系统把膜或凝胶表面的信号转换为经过校准的数字图像。化学发光成像无需激发光：辣根过氧化物酶等酶将底物转化为激发态产物并发射光子，由冷却 CCD 或 CMOS 传感器在数分钟内积分这一微弱发射信号。荧光成像则由 LED 或激光激发荧光基团，并通过带通滤光片收集发射光，可实现不同标记抗体的多重检测。比色系统使用白光或彩色照明，测量透射或反射光以定量考马斯亮蓝等染色条带。激光扫描仪器使聚焦光束在表面逐点扫描并记录信号，可获得高空间分辨率和较宽的线性动态范围。无论哪种方式，软件都会扣除背景、把像素强度转换为光密度，并将条带与标准品或内参对照比较。## 主要特点有哪些？- 在窄波段或全发射范围内采集光谱 - 线性解混分离重叠的荧光信号 - 每个样品可检测五至七种标记靶标 - 去除膜或组织自发荧光背景 - 从单色对照中采集参考光谱 - 定量分析并输出各通道强度表

技术参数有哪些？典型的多光谱荧光成像系统配置：光谱通道为 8–32 narrow bands or continuous spectral scan；波长范围为 approx. 400–900 nm；多重能力为 5–7 targets per sample (dye dependent)；激发光源为 LED or laser lines, 4–8 selectable；检测器为 Cooled CCD or sCMOS；解混方式为 Linear unmixing from single-colour reference spectra。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？多光谱荧光成像系统主要用于多重定量 Western 印迹、多重免疫组化成像、组织切片自发荧光的去除、多标记共定位研究。在更广泛的蛋白质成像系统类别中，实验室还将其用于 Western 印迹条带定量、染色凝胶的蛋白质纯度评估、多重荧光免疫检测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 USP <1057>、Ph. Eur. 2.2.31、IEC 61010-1、ISO 17025、21 CFR Part 11、ISO 9001。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。成像区域应保持清洁、无尘，因为颗粒会散射光线并显示为假条带。应避免传感器饱和，因为饱和像素无法用于定量；多数软件会给出提示，并应通过曝光序列确认信号处于线性范围内。化学发光底物在数分钟至一小时内衰减，因此成像应遵循供应商的时间建议并在样品之间保持一致。荧光膜在反复曝光后会褪色，因此应尽量一次采集完成。仪器应定期用阶梯光楔或荧光标准品校准，并记录所用参数，使不同时间采集的图像可比。应归档原始文件而不仅是处理后的图片，因为定量结果可能需要重新分析。## 如何选择合适的多光谱荧光成像系统？当需要同时测量三个以上靶标，或自发荧光干扰弱信号时，应选择多光谱成像系统。询价时应注明光谱通道数量与范围、激发选项、多重检测能力、解混软件及其所需的参考光谱采集流程。### 与其他蛋白质成像系统型号相比如何？应根据检测化学体系选择探测器。化学发光需要暗电流低、可长时间积分的冷却传感器，绝对灵敏度比分辨率更重要。荧光需要匹配的激发光源和发射滤光片，滤光片应覆盖实际使用的染料，包括用于低背景多重检测的近红外染料对。比色和光密度定量需要均匀照明和颜色校准，才能使考马斯或银染结果可定量。激光扫描适合对线性动态范围和高分辨率要求苛刻的应用，例如需检出微小杂质峰的纯度测定。还应确认相机或扫描仪分辨率（每像素对应的毫米数）、以数量级表示的动态范围、制冷温度、成像面积、光源寿命，以及软件是否支持背景扣除、饱和提示、泳道曲线分析和数值数据导出。