近红外荧光成像系统

什么是近红外荧光成像系统？近红外荧光成像系统激发标记 700 nm 和 800 nm 荧光基团的抗体，并用匹配滤光片检测发射光，可实现低背景多重检测和宽线性范围的定量 Western 印迹。## 概述

近红外成像使用约 685 和 785 nm 的两种激光或 LED，配合约 720 和 820 nm 的发射滤光片。膜在该波段的散射和自发荧光远低于可见光区，因此背景低，可在同一张膜上同时检测两个或更多靶标，无需剥离重杂交。由于信号在较宽范围内与标记抗体量成正比，通常跨三到四个数量级，其定量可靠性高于线性范围较窄的化学发光。该方法既适用于直接标记的一抗，也适用于标记的二抗，而且荧光基团衰减速度比化学发光底物慢，因此可以重复成像。## 工作原理是什么？成像系统把膜或凝胶表面的信号转换为经过校准的数字图像。化学发光成像无需激发光：辣根过氧化物酶等酶将底物转化为激发态产物并发射光子，由冷却 CCD 或 CMOS 传感器在数分钟内积分这一微弱发射信号。荧光成像则由 LED 或激光激发荧光基团，并通过带通滤光片收集发射光，可实现不同标记抗体的多重检测。比色系统使用白光或彩色照明，测量透射或反射光以定量考马斯亮蓝等染色条带。激光扫描仪器使聚焦光束在表面逐点扫描并记录信号，可获得高空间分辨率和较宽的线性动态范围。无论哪种方式，软件都会扣除背景、把像素强度转换为光密度，并将条带与标准品或内参对照比较。## 主要特点有哪些？- 约 700 和 800 nm 两个近红外通道 - 膜与缓冲液的自发荧光背景低 - 无需剥离即可同时检测两个及以上靶标 - 线性范围达三到四个数量级 - 兼容直接标记与二抗标记 - 可重复成像且信号衰减不明显

技术参数有哪些？典型的近红外荧光成像系统配置：激发波长为 approx. 685 and 785 nm；发射滤光片为 approx. 720 and 820 nm；动态范围为 approx. 3–4 orders of magnitude；检出限为 low femtogram to picogram per band (antibody dependent)；扫描时间为 approx. 2–10 min per membrane；成像面积为 approx. 100 x 150 mm。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？近红外荧光成像系统主要用于同一张膜上的多重蛋白检测、磷酸化与总蛋白比值测定、多样品定量表达比较、无需重杂交的内参归一。在更广泛的蛋白质成像系统类别中，实验室还将其用于 Western 印迹条带定量、染色凝胶的蛋白质纯度评估、多重荧光免疫检测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 USP <1057>、Ph. Eur. 2.2.31、IEC 61010-1、ISO 17025、21 CFR Part 11、ISO 9001。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。成像区域应保持清洁、无尘，因为颗粒会散射光线并显示为假条带。应避免传感器饱和，因为饱和像素无法用于定量；多数软件会给出提示，并应通过曝光序列确认信号处于线性范围内。化学发光底物在数分钟至一小时内衰减，因此成像应遵循供应商的时间建议并在样品之间保持一致。荧光膜在反复曝光后会褪色，因此应尽量一次采集完成。仪器应定期用阶梯光楔或荧光标准品校准，并记录所用参数，使不同时间采集的图像可比。应归档原始文件而不仅是处理后的图片，因为定量结果可能需要重新分析。## 如何选择合适的近红外荧光成像系统？当重视多重检测、宽动态范围和可重复定量，或剥离重杂交会损伤印迹时，应选择近红外成像系统。询价时应注明激发与发射波长、通道数量、动态范围、扫描时间、膜兼容性和分析软件。### 与其他蛋白质成像系统型号相比如何？应根据检测化学体系选择探测器。化学发光需要暗电流低、可长时间积分的冷却传感器，绝对灵敏度比分辨率更重要。荧光需要匹配的激发光源和发射滤光片，滤光片应覆盖实际使用的染料，包括用于低背景多重检测的近红外染料对。比色和光密度定量需要均匀照明和颜色校准，才能使考马斯或银染结果可定量。激光扫描适合对线性动态范围和高分辨率要求苛刻的应用，例如需检出微小杂质峰的纯度测定。还应确认相机或扫描仪分辨率（每像素对应的毫米数）、以数量级表示的动态范围、制冷温度、成像面积、光源寿命，以及软件是否支持背景扣除、饱和提示、泳道曲线分析和数值数据导出。