文库制备系统

什么是文库制备系统？文库制备系统通过末端修复、接头连接、加条码和扩增，将片段化的 DNA 或 RNA 转化为可直接测序的文库，并自动完成重复步骤以获得可重复的新一代测序文库。## 概述

文库制备系统构建测序平台可读取的文库。它进行末端修复，并在需要时对片段末端加 A，连接带平台特异性序列和样品条码的接头，对文库进行片段选择，并用有限循环数的 PCR 扩增以加入索引序列并获得足够的成簇材料。部分方法基于转座酶，将片段化和接头添加合并在一步酶促反应中，RNA 流程则从互补 DNA 合成开始。文库制备可用磁珠和热循环仪手动完成，也可在液体处理工作站上自动完成，后者控制磁珠比例、洗涤步骤和温控程序。质量控制会在合并前检查片段大小分布、浓度和接头二聚体。重现性取决于精确的试剂比例、磁珠操作和热循环仪性能。## 工作原理是什么？分子处理系统通过受控的化学和液体处理来操作 DNA 和 RNA。提取通过裂解细胞或样品，再结合到硅胶膜或磁珠上分离核酸，经洗涤去除蛋白和抑制剂后以小体积洗脱。定量通过紫外吸收或荧光染料结合测定浓度和纯度，完整性可通过电泳或片段分析检查。片段化通过酶切、超声或流体剪切将长 DNA 打断为受控的尺寸范围，这是短读长测序前所必需的。文库制备随后连接接头和条码并扩增片段。自动化平台通过精确移液、加热和磁分离协调这些步骤，软件跟踪样品、试剂和结果，满足分子流程所需的可追溯性。## 主要特点有哪些？- 末端修复、接头连接和加条码 - 自动化磁珠法片段选择 - 使用带索引引物的有限循环 PCR - 合并前检查接头二聚体 - 保证文库可重复的方法模板

技术参数有哪些？典型的文库制备系统配置：DNA 输入量为 1 ng–1 µg；文库制备时间为 1.5–6 h；每次运行样品数为 1–96 (automated)；条码为 Up to 384 indexes；片段选择为 Bead-based, 150–800 bp；PCR 循环数为 5–15, method dependent。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？文库制备系统主要用于全基因组和靶向测序、RNA 测序流程、微生物组和宏基因组研究、临床和科研基因组学。在更广泛的分子处理系统类别中，实验室还将其用于基因组学和测序流程、分子诊断开发、生物制药细胞株表征。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 13485、ISO 20395、CLSI MM13、CLSI MM03、21 CFR Part 11、ISO 15189、IEC 61010-1。本型号的认证候选包括 CE、ISO 13485 manufacturing、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应按从提取到扩增的单向流程操作以防扩增子污染，并为各阶段使用独立区域和移液器。使用推荐的试剂清洁台面和设备，并设置无模板对照以发现污染。试剂应在规定温度范围内保存，并在方法验证时检查批间性能。应监测核酸纯度比值和完整性，因为带入扩增的抑制剂会导致假阴性。提取和文库制备方法应受版本控制，并随每批次记录试剂批号。用于临床或受监管用途时，应针对参考方法验证，并确认软件提供所需的审计追踪和数据安全。## 如何选择合适的文库制备系统？应根据流程、样品数量和自动化程度选择文库制备系统。询价时应说明输入量和类型、测序平台和读长、条码需求、通量、自动化、片段选择范围以及提供的质控和数据跟踪功能。### 与其他分子处理系统型号相比如何？应根据样品类型、通量和下游应用选择系统。提取时，应确认支持的样品基质、输入范围、洗脱体积以及针对目标可达到的得率和纯度，并判断磁珠法还是膜法适合工作流程。定量时，宽浓度范围可选紫外吸收法，DNA 或 RNA 量少且需更高灵敏度时可选荧光法。片段化时，应确定目标插入片段大小和可接受的尺寸分布。文库制备时，应核查与所用测序平台和读长的兼容性、每次运行的样品数以及条码选项。在整个类别中，应核实自动化程度、防交叉污染措施、试剂形式、软件可追溯性以及所需的验证文件。