核酸定量系统

什么是核酸定量系统？核酸定量系统通过紫外吸收或荧光测量 DNA 或 RNA 的浓度和纯度，为扩增、测序和文库制备提供所需的准确输入值。## 概述

核酸定量系统测定样品中 DNA 或 RNA 的含量及其洁净程度。分光光度仪器测量紫外和可见波段的吸收，根据 260 nm 峰值报告浓度，并根据 260 与 280 nm 及 260 与 230 nm 比值报告纯度，许多微量型号仅需一至二微升样品且无需比色皿。荧光仪器使用仅在结合 DNA 或 RNA 时才发光的染料，对双链 DNA、单链 DNA 或 RNA 提供更高灵敏度和选择性，这在浓度较低或样品含其他核酸时尤为重要。部分系统兼具两种功能，高端平台还增加片段分析以报告尺寸分布和完整性，这是测序或克隆前的重要质量属性。## 工作原理是什么？分子处理系统通过受控的化学和液体处理来操作 DNA 和 RNA。提取通过裂解细胞或样品，再结合到硅胶膜或磁珠上分离核酸，经洗涤去除蛋白和抑制剂后以小体积洗脱。定量通过紫外吸收或荧光染料结合测定浓度和纯度，完整性可通过电泳或片段分析检查。片段化通过酶切、超声或流体剪切将长 DNA 打断为受控的尺寸范围，这是短读长测序前所必需的。文库制备随后连接接头和条码并扩增片段。自动化平台通过精确移液、加热和磁分离协调这些步骤，软件跟踪样品、试剂和结果，满足分子流程所需的可追溯性。## 主要特点有哪些？- 1–2 微升样品的紫外吸收测量 - 用于低浓度样品的荧光检测 - 自动计算纯度比值 - 可选片段大小和完整性分析 - 结果导出至电子表格或 LIMS

技术参数有哪些？典型的核酸定量系统配置：测量原理为 UV absorbance and/or fluorescence；波长范围为 200–900 nm；最小样品体积为 1–2 µL；DNA 检测限为 1–2 ng/µL (UV); 0.01–0.1 ng/µL (fluorescence)；浓度范围为 2–15,000 ng/µL (UV, path dependent)；纯度比值为 260/280 and 260/230。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？核酸定量系统主要用于测序前样品质量控制、PCR 和 qPCR 输入标准化、克隆和转染准备、生物工艺核酸监测。在更广泛的分子处理系统类别中，实验室还将其用于基因组学和测序流程、分子诊断开发、生物制药细胞株表征。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 13485、ISO 20395、CLSI MM13、CLSI MM03、21 CFR Part 11、ISO 15189、IEC 61010-1。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、ISO 13485 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应按从提取到扩增的单向流程操作以防扩增子污染，并为各阶段使用独立区域和移液器。使用推荐的试剂清洁台面和设备，并设置无模板对照以发现污染。试剂应在规定温度范围内保存，并在方法验证时检查批间性能。应监测核酸纯度比值和完整性，因为带入扩增的抑制剂会导致假阴性。提取和文库制备方法应受版本控制，并随每批次记录试剂批号。用于临床或受监管用途时，应针对参考方法验证，并确认软件提供所需的审计追踪和数据安全。## 如何选择合适的核酸定量系统？宽浓度范围和常规纯度检查可选紫外法，低浓度和选择性检测可选荧光法，测序流程则可选兼具两者或含片段分析的平台。询价时应说明检测原理、样品体积、浓度范围、通道和数据导出。### 与其他分子处理系统型号相比如何？应根据样品类型、通量和下游应用选择系统。提取时，应确认支持的样品基质、输入范围、洗脱体积以及针对目标可达到的得率和纯度，并判断磁珠法还是膜法适合工作流程。定量时，宽浓度范围可选紫外吸收法，DNA 或 RNA 量少且需更高灵敏度时可选荧光法。片段化时，应确定目标插入片段大小和可接受的尺寸分布。文库制备时，应核查与所用测序平台和读长的兼容性、每次运行的样品数以及条码选项。在整个类别中，应核实自动化程度、防交叉污染措施、试剂形式、软件可追溯性以及所需的验证文件。