高通量文库制备平台

什么是高通量文库制备平台？高通量文库制备平台通过机械平台单轮处理 96 至 384 个文库，并整合浓度归一、混合与质量控制，为每周需制备数千个文库且要求质量一致的测序平台和服务机构服务。## 概述

该平台在单一台面上集成多通道移液头、磁力模块、加热与制冷模块、扩增模块和板架。文库在 96 孔或 384 孔板中构建，随后定量、归一到统一浓度并混合到同一管中用于测序。台面排程允许数块板以重叠批次处理，因此根据方案不同，一个工作日的通量可达 384–1,536 个文库。每次转板读取条码并与 LIMS 连接，使文库身份始终与样品记录关联。由于纯化、PCR 和归一由同一台面完成，板间一致性较高，但方案须按试剂盒逐一验证，并在试剂或耗材变更时重新验证。台面容量、吸头管理和脚本验证工作量是实际限制因素。## 工作原理是什么？测序文库是两侧带已知接头序列的 DNA 片段集合，测序仪可识别这些接头。制备从片段化开始，可通过酶切、转座酶切割或超声处理获得既定大小分布。末端修复和 3' 端加腺嘌呤使末端可连接，随后通过连接反应接上带样品索引的接头，或在使用转座酶时直接引入接头。利用磁珠或非凝胶法进行片段筛选，去除目标区间之外的片段，再通过有限循环 PCR 富集文库并补齐索引序列。各步骤之间用磁珠纯化去除酶、盐和短片段。制备 RNA 文库时，先在反转录和链特异性第二链合成之后进入相同流程。制备完成后通过荧光法测浓度、毛细管电泳测片段大小分布进行质量控制。## 主要特点有哪些？- 机械台面配 96 或 384 通道移液 - 台面磁力模块完成纯化与片段筛选 - 整合浓度归一与混合装管 - 荧光定量模块测定文库产量 - 每次转板读取条码并与 LIMS 集成 - 支持多板排程与重叠批次处理

技术参数有哪些？典型的高通量文库制备平台配置：单轮文库数为 96–384；每日可制备文库数为 approx. 384–1,536；移液通道为 96 or 384；体积范围为 1–1,000 µL；移液准确度为 within ±2% at 200 µL (typical)；板规格为 96-well and 384-well。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？高通量文库制备平台主要用于测序共享平台的生产型流程、群体规模全基因组文库、大型 RNA 测序队列、大批量处理的诊断组合。在更广泛的文库制备系统类别中，实验室还将其用于全基因组与外显子组文库构建、RNA 测序文库制备、单细胞与低起始量文库流程。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20395、ISO 15189、CLSI MM09、IEC 61010-1、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。文库制备应在与扩增后区域和测序区域分开的 PCR 前区进行，并使用不会离开该区域的专用移液器、管架和试剂。此前文库带来的污染会表现为异常的索引组合，因此每批应设置无模板对照，并监测不同运行之间的索引跳跃。试剂对冻融敏感，酶应分装并记录批号。新试剂盒或自动化脚本在常规使用前，应针对参考样品验证产量、插入片段大小和文库复杂度。由于文库产量决定测序数据质量，应保留能把每个文库与其样品、索引、试剂盒批号和操作者关联起来的记录，以便审核时可追溯。## 如何选择合适的高通量文库制备平台？当文库批次经常装满 96 孔板，且浓度归一或混合已成为瓶颈时，应选择高通量文库制备平台。询价时应注明台面容量、通道数、支持的试剂盒、台面定量能力、LIMS 集成方式、吸头消耗，以及受监管用途所需的验证文件。### 与其他文库制备系统型号相比如何？应从测序平台和起始样品入手。短读长仪器需要与流动池化学体系匹配的接头文库，长读长仪器则需要高分子量起始样品并尽量减少 PCR。估算每样品起始量，因为低起始量和单细胞流程需要专门的化学体系。随后在以下方案之间选择：偶尔使用的手工试剂盒；每批 8–96 个样品、可无人值守运行的磁珠自动化；以及可处理数百个样品并整合浓度归一与混合的全液体处理平台。还应确认片段化方式、索引类型与多重水平、片段筛选方法、所需设备（如磁力架或恒温混匀仪），以及供应商是否提供针对你所处样品类型的经验证方案。手工文库制备是批次效应的常见来源，样品量大时自动化通常更划算。