自动化磁珠法文库制备系统

什么是自动化磁珠法文库制备系统？自动化磁珠法文库制备系统在磁珠平台上完成片段化、末端修复、接头连接、纯化和片段筛选，每批处理 8 至 96 个样品，是把常规文库构建从手工台面转移到自动化流程的常用选择。## 概述

该系统在加热模块上放置深孔板或排管，用磁头在每次纯化时收集磁珠，并通过移液而非离心柱更换试剂。程序涵盖酶法片段化、末端修复与加腺嘌呤、接头连接、两步磁珠片段筛选以及配合台面扩增模块的有限循环 PCR。处理 24–48 个样品的典型方案时间为 3–6 小时，其中人工准备约 15 分钟。由于体积和磁分离时间由程序固定，批次间差异通常小于手工制备，脚本还会记录所用试剂盒批号和方案版本。多数系统支持标准磁珠化学体系，并可编程实现自定义方案，耗材成本适中。## 工作原理是什么？测序文库是两侧带已知接头序列的 DNA 片段集合，测序仪可识别这些接头。制备从片段化开始，可通过酶切、转座酶切割或超声处理获得既定大小分布。末端修复和 3' 端加腺嘌呤使末端可连接，随后通过连接反应接上带样品索引的接头，或在使用转座酶时直接引入接头。利用磁珠或非凝胶法进行片段筛选，去除目标区间之外的片段，再通过有限循环 PCR 富集文库并补齐索引序列。各步骤之间用磁珠纯化去除酶、盐和短片段。制备 RNA 文库时，先在反转录和链特异性第二链合成之后进入相同流程。制备完成后通过荧光法测浓度、毛细管电泳测片段大小分布进行质量控制。## 主要特点有哪些？- 单轮可制备 8、24 或 96 个文库 - 台面加热与磁分离完成磁珠纯化 - 程序化执行片段化、连接、片段筛选和 PCR - 自动加试剂并记录吸头与试剂使用 - 记录方案版本与试剂盒批号，便于追溯 - 兼容标准磁珠化学体系

技术参数有哪些？典型的自动化磁珠法文库制备系统配置：单轮文库数为 8, 24 or 96；方案时间为 approx. 3–6 h；人工准备时间为 approx. 15–30 min；起始 DNA 量为 10 ng–1 µg (kit dependent)；片段化方式为 Enzymatic, on-deck；片段筛选为 Two-step magnetic bead selection。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？自动化磁珠法文库制备系统主要用于常规全基因组与外显子组文库、RNA 测序文库构建、扩增子与靶向组合文库、诊断实验室批样品制备。在更广泛的文库制备系统类别中，实验室还将其用于全基因组与外显子组文库构建、RNA 测序文库制备、单细胞与低起始量文库流程。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20395、ISO 15189、CLSI MM09、IEC 61010-1、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。文库制备应在与扩增后区域和测序区域分开的 PCR 前区进行，并使用不会离开该区域的专用移液器、管架和试剂。此前文库带来的污染会表现为异常的索引组合，因此每批应设置无模板对照，并监测不同运行之间的索引跳跃。试剂对冻融敏感，酶应分装并记录批号。新试剂盒或自动化脚本在常规使用前，应针对参考样品验证产量、插入片段大小和文库复杂度。由于文库产量决定测序数据质量，应保留能把每个文库与其样品、索引、试剂盒批号和操作者关联起来的记录，以便审核时可追溯。## 如何选择合适的自动化磁珠法文库制备系统？当文库数量足以脱离手工制备，且需要稳定的插入片段大小和产量时，应选择自动化磁珠法系统。询价时应注明批次规模、支持的试剂盒、片段化方式、片段筛选选项、方案编程自由度，以及试剂盒批号和方案版本的记录方式。### 与其他文库制备系统型号相比如何？应从测序平台和起始样品入手。短读长仪器需要与流动池化学体系匹配的接头文库，长读长仪器则需要高分子量起始样品并尽量减少 PCR。估算每样品起始量，因为低起始量和单细胞流程需要专门的化学体系。随后在以下方案之间选择：偶尔使用的手工试剂盒；每批 8–96 个样品、可无人值守运行的磁珠自动化；以及可处理数百个样品并整合浓度归一与混合的全液体处理平台。还应确认片段化方式、索引类型与多重水平、片段筛选方法、所需设备（如磁力架或恒温混匀仪），以及供应商是否提供针对你所处样品类型的经验证方案。手工文库制备是批次效应的常见来源，样品量大时自动化通常更划算。