寡核苷酸分析用变性尿素-PAGE 系统

什么是寡核苷酸分析用变性尿素-PAGE 系统？配加热板和尿素变性凝胶的垂直电泳系统，可分辨相差一个碱基的短单链核酸，用于寡核苷酸质量控制和微小 RNA 分析。## 概述

变性尿素-PAGE 系统使用垂直板夹，凝胶为含 6 至 8 M 尿素的 15% 至 20% 薄层聚丙烯酰胺，可保持单链核酸变性，使迁移主要取决于长度。装置包括铝板或玻璃导热板、将温度维持在 45 至 60 °C 的恒温循环器或电阻加热器，以及带上、下储液腔的缓冲液槽。典型上样量为 0.2 至 5 nmol 寡核苷酸，条带可通过紫外阴影法、嵌入染料或荧光标记观察，对 10 至 100 个核苷酸的片段可分辨单碱基差异。运行时间为 1 至 3 小时，凝胶可在玻璃板之间自行灌注或购买预制胶。仔细清洁玻璃板并均匀加热可防止条带弯曲和凝胶撕裂。## 工作原理是什么？电泳时，电场驱动带电分子通过凝胶基质：核酸因磷酸骨架带负电而向阳极迁移，其大小和构象决定穿过孔隙的速度。0.5% 至 2% 的琼脂糖凝胶可分离约 100 bp 至 20 kb 的片段，TAE 或 TBE 等缓冲液在电极间传导电流。电压按凝胶长度设定，通常为 5 至 10 V/cm，因为电压越高运行越快但会使凝胶发热并使条带模糊。上样染料增加密度并含指示染料，分子量标记通过比对给出片段长度。检测使用紫外或蓝光下的嵌入染料，芯片系统则使用荧光标记。变性尿素-PAGE 可分辨短寡核苷酸中的单碱基差异。## 主要特点有哪些？- 垂直板夹，适用 15% 至 20% 尿素-聚丙烯酰胺凝胶。- 加热板在运行中维持 45 至 60 °C。- 可分辨短片段中的单碱基差异。- 支持紫外阴影法和荧光检测。- 可使用预制胶或自行灌注，多种厚度可选。- 可选缓冲液循环，保持 pH 稳定。## 技术参数有哪些？典型的寡核苷酸分析用变性尿素-PAGE 系统配置：凝胶规格为 Vertical, 15-20 percent polyacrylamide with 6-8 M urea；凝胶尺寸为 16 cm × 18 cm to 20 cm × 40 cm；凝胶厚度为 0.4, 0.75 or 1.0 mm；运行温度为 45-60 °C via heated plate；电压范围为 500-2,000 V；典型运行时间为 1-3 h。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？寡核苷酸分析用变性尿素-PAGE 系统主要用于寡核苷酸合成质量控制、微小 RNA 和 siRNA 分析、适配体和引物纯度检查、短标记探针的单碱基分辨。在更广泛的电泳仪类别中，实验室还将其用于 PCR 产物验证、DNA 片段长度测定和酶切图谱分析、二代测序文库质量控制。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 IEC 61010-1、IEC 61010-2-081、IEC 61326-1、ISO 13485 manufacturing、CLSI MM13-A。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 test report；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应在专用区域制备凝胶，并在水平台面上灌注。使用按推荐比例新鲜配制的缓冲液，因为重复使用会改变 pH 和电导率，同时检查电极丝和接头是否清洁。运行时应盖好电泳槽，以减少蒸发并保护操作者免受紫外或电击危险，运行期间切勿接触缓冲液或电极。尽量选用低毒染料，并按当地规定处理溴化乙锭或其他嵌入剂。每次运行后清洁并冲洗电泳槽，去除染料残留和琼脂糖。按固定周期检查电源校准，并检查凝胶托盘裂纹、导线老化和盖联锁松动。## 如何选择合适的寡核苷酸分析用变性尿素-PAGE 系统？当需要将短单链核酸分辨到单碱基水平（如寡核苷酸质控或 siRNA 分析）时，选择该系统。将凝胶尺寸与所需分辨率比较，确认加热板可维持所需温度，并检查是否有适合厚度的预制胶。规划时需一并考虑兼容的高压电源和检测方法。### 与其他电泳仪型号相比如何？使方法与分子种类和所需分辨率相匹配。卧式槽琼脂糖电泳是双链 DNA 片段和 PCR 产物的标准方法，变性尿素-PAGE 用于寡核苷酸和单链片段，筛分聚合物芯片系统用于多样品的准确片段长度测定和定量。随后由通量决定在手动槽、多通道设备和集电泳与成像于一体的自动系统之间选择。考虑凝胶规格和加样孔数量、缓冲液体积和冷却方式以及检测方法，因为染料、紫外照射和荧光光学部件在灵敏度和安全性上各不相同。对于电源，检查电压、电流和功率限值、可编程性以及是否支持恒压、恒流或恒功率模式。