流式细胞计数仪

什么是流式细胞计数仪？流式细胞计数仪将样品与已知数量的参考微球混合，通过细胞事件与微球事件的比例计算绝对计数，在一次采集同时获得浓度、标志物和活率信息。## 概述

流式绝对计数使用浓度已知的冻干或液体微球悬液，按固定体积加入样品。采集时仪器在微球计数门内记录事件，并在细胞及细胞亚群门内分别记录，软件依据微球数和稀释倍数计算浓度。由于设门可排除碎片、红细胞和死细胞，因此可报告经活率校正的亚群计数，这对免疫表型分析和临床淋巴细胞亚群计数很有价值。在控制微球浓度和移液操作的情况下，典型准确度为参考方法的 5–10% 以内。该方法对移液操作要求严格，因为体积误差会直接进入结果，同时需要经过验证的组合和补偿设置。## 工作原理是什么？各种计数方法区分细胞与碎片、死细胞的方式不同。台盼蓝排斥法依赖活细胞完整膜排斥染料的能力，因此透射光下活细胞明亮、死细胞呈蓝色；自动化计数仪对计数腔中固定体积成像，并按大小、形状和亮度对对象分类。荧光法使用吖啶橙和碘化丙啶，分别对所有细胞核和膜受损细胞核染色，通过两个通道得出浓度和活率，受红细胞、血小板和碎片干扰较小。电阻抗计数仪使细胞通过小孔并计数电压脉冲，脉冲高度反映细胞体积。流式计数法加入已知数量的参考微球，通过细胞事件与微球事件的比例计算绝对计数，同时提供标志物信息。所有方法都要求样品充分混匀并适当稀释才能保证准确。## 主要特点有哪些？- 采用参考微球法测定细胞绝对浓度 - 通过设门排除碎片、红细胞和死细胞 - 同时获得浓度、活率和标志物信息 - 可给出经活率校正的亚群计数 - 支持用于临床的经验证组合与补偿设置 - 报告中包含微球计数与稀释倍数

技术参数有哪些？典型的流式细胞计数仪配置：参考微球为 Known concentration suspension added in fixed volume；荧光通道为 4–12 (instrument dependent)；计数准确度为 within ±5–10% of reference method；浓度范围为 approx. 1 x 10³–1 x 10⁷ cells/mL；样品体积为 50–500 µL per acquisition；采集速度为 up to 10,000 events per second。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？流式细胞计数仪主要用于淋巴细胞亚群计数、免疫表型分析与绝对计数、细胞治疗产品表征、经活率校正的细胞给药量计算。在更广泛的细胞计数仪类别中，实验室还将其用于实验前接种密度测定、培养生长与活率监测、细胞治疗产品放行计数。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20387、ISO 15189、IEC 61010-1、IEC 60825-1、USP <1046>、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety、IVD marking；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。准确性更多取决于样品处理而非仪器本身。细胞沉降很快，因此在取样前应轻轻颠倒混匀或用低速移液混匀，避免剧烈涡旋损伤细胞膜。应将样品稀释到方法的线性范围内，因为过浓样品会使传感器饱和，而过稀样品会降低精密度。计数板或计数腔等耗材应一次性使用并按生物危害废弃物处置。应定期清洁光学系统和样品流路，并避免使用含强染料或荧光化合物、会干扰荧光通道的样品。每种新细胞类型或基质都应与血细胞计数板或经验证的流式计数等参考方法比对验证，并记录所用稀释倍数和参数，因为不同实验室对活率的定义可能不同。## 如何选择合适的流式细胞计数仪？当浓度测定需与标志物表达结合，或报告需要经活率校正的亚群计数时，应选择流式计数。询价时应注明激光与检测器配置、支持的微球试剂盒、组合验证支持，以及仪器是否已注册用于临床。### 与其他细胞计数仪型号相比如何？应根据样品类型和所需准确度选择。常规培养已建立的细胞系，使用台盼蓝图像法计数仪即可满足需求且成本较低。当样品含碎片、红细胞、血小板或结团，或活率较低需要精确测定时，应选择采用吖啶橙和碘化丙啶的荧光计数仪，通过细胞核染色报告浓度和活率。阻抗计数仪适合连续监测细胞大小分布，也适合光学澄清度多变的样品。当计数需与表面标志物测定结合，或临床报告需要绝对计数时，应选择流式计数法。还应确认线性范围、样品体积、单次计数时间、耗材成本、清洁要求，以及仪器是否提供聚集体或结团校正。