双荧光细胞计数仪

什么是双荧光细胞计数仪？双荧光细胞计数仪用吖啶橙和碘化丙啶对细胞核染色并测量两个通道，即使样品中含红细胞、血小板或碎片也能报告浓度和活率，适合准确性比单次计数成本更重要的场景。## 概述

吖啶橙使所有有核细胞呈绿色，碘化丙啶仅使膜受损细胞呈红色。由于两种染料都靶向核酸，因此只有有核对象被计数，无核碎片、红细胞和血小板被忽略。这使该方法适用于骨髓、外周血、组织消化液和活率较低的冻存样品等台盼蓝计数不可靠的场景。典型样品体积为 10–20 µL，计数在一分钟内完成。浓度线性范围约为 10⁴ 至 10⁷ cells/mL，结果同时报告仅绿色和仅红色对象数量。其灵敏度足以定量低于 50% 的活率，而染料排斥法在此区间准确性下降，结果可导出用于批次记录。## 工作原理是什么？各种计数方法区分细胞与碎片、死细胞的方式不同。台盼蓝排斥法依赖活细胞完整膜排斥染料的能力，因此透射光下活细胞明亮、死细胞呈蓝色；自动化计数仪对计数腔中固定体积成像，并按大小、形状和亮度对对象分类。荧光法使用吖啶橙和碘化丙啶，分别对所有细胞核和膜受损细胞核染色，通过两个通道得出浓度和活率，受红细胞、血小板和碎片干扰较小。电阻抗计数仪使细胞通过小孔并计数电压脉冲，脉冲高度反映细胞体积。流式计数法加入已知数量的参考微球，通过细胞事件与微球事件的比例计算绝对计数，同时提供标志物信息。所有方法都要求样品充分混匀并适当稀释才能保证准确。## 主要特点有哪些？- 吖啶橙与碘化丙啶双通道染色 - 仅计数有核细胞，忽略红细胞和碎片 - 活率低于 50% 时仍可可靠测定 - 每样品一分钟内完成计数 - 分别报告仅绿色、仅红色与总对象数 - 结果可导出用于批次与质量记录

技术参数有哪些？典型的双荧光细胞计数仪配置：样品体积为 10–20 µL per count；计数时间为 under 1 min；浓度范围为 approx. 1 x 10⁴–1 x 10⁷ cells/mL；活率范围为 capable below 50% viable cells；激发波长为 approx. 470 nm (blue) and 530 nm (green)；发射通道为 approx. 525 nm green and 600 nm red。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？双荧光细胞计数仪主要用于血液与骨髓样品计数、冻存细胞活率评估、组织消化液与类器官细胞计数、细胞治疗产品质量控制。在更广泛的细胞计数仪类别中，实验室还将其用于实验前接种密度测定、培养生长与活率监测、细胞治疗产品放行计数。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20387、ISO 15189、IEC 61010-1、IEC 60825-1、USP <1046>、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。准确性更多取决于样品处理而非仪器本身。细胞沉降很快，因此在取样前应轻轻颠倒混匀或用低速移液混匀，避免剧烈涡旋损伤细胞膜。应将样品稀释到方法的线性范围内，因为过浓样品会使传感器饱和，而过稀样品会降低精密度。计数板或计数腔等耗材应一次性使用并按生物危害废弃物处置。应定期清洁光学系统和样品流路，并避免使用含强染料或荧光化合物、会干扰荧光通道的样品。每种新细胞类型或基质都应与血细胞计数板或经验证的流式计数等参考方法比对验证，并记录所用稀释倍数和参数，因为不同实验室对活率的定义可能不同。## 如何选择合适的双荧光细胞计数仪？当样品含无核细胞或碎片、活率偏低，或结果需在质量记录中经得起核查时，应选择双荧光计数仪。询价时应注明浓度与活率范围、染料试剂盒形式、数据输出格式，以及用于验证的参考方法。### 与其他细胞计数仪型号相比如何？应根据样品类型和所需准确度选择。常规培养已建立的细胞系，使用台盼蓝图像法计数仪即可满足需求且成本较低。当样品含碎片、红细胞、血小板或结团，或活率较低需要精确测定时，应选择采用吖啶橙和碘化丙啶的荧光计数仪，通过细胞核染色报告浓度和活率。阻抗计数仪适合连续监测细胞大小分布，也适合光学澄清度多变的样品。当计数需与表面标志物测定结合，或临床报告需要绝对计数时，应选择流式计数法。还应确认线性范围、样品体积、单次计数时间、耗材成本、清洁要求，以及仪器是否提供聚集体或结团校正。