超高效液相色谱仪

超高效液相色谱仪的工作原理是什么？UHPLC 遵循与 HPLC 相同的分配原理，但利用了范第姆特关系：更小的粒径降低涡流扩散和传质阻力，因此在更高线速度下柱效仍保持较高。填料粒径 1.7–1.9 µm 的色谱柱，常见内径 2.1 mm、长 50–150 mm，会产生数百 bar 的背压，这要求泵、阀和进样器的额定压力达到 1000 bar 或更高。必须使用窄径管路、低体积混合器和 1–2 µL 流通池来尽量减小柱外扩散，否则通常仅 1–3 秒宽的窄峰会变宽。需要 40–200 Hz 的快速检测器采样率来定义峰形，柱温箱采用主动预热控制摩擦热。流动相须经 0.2 µm 过滤以保护筛板。在 HPLC 上需 30 分钟的分析往往可在 3–10 分钟内完成。## 超高效液相色谱仪有哪些型号？- 二元超高效液相色谱系统：二元超高效液相色谱系统将两台额定约 1000 bar 的高压泵与低滞留体积、低扩散管路相结合。- 四元超高效液相色谱系统：四元超高效液相色谱系统在额定约 600–800 bar 的单泵之前低压混合最多四种溶剂。- 1300 bar 超高压超高效液相色谱系统：超高压超高效液相色谱系统最高工作压力可达 1300 bar，可在 150–300 mm 色谱柱上使用亚 2 µm 填料，或在短柱上使用极高流速。- 微流量超高效液相色谱系统：微流量超高效液相色谱系统通过内径 0.3–1.0 mm 的色谱柱，在 1–100 µL/min 下提供稳定梯度。- 二维超高效液相色谱系统：二维超高效液相色谱系统通过切换阀将两根选择性不同的色谱柱联用，把第一维的选定馏分转移到快速的第二维分离。## 如何选择合适的型号？决定性参数包括耐压等级、滞留体积和柱外体积、检测器速度，以及是否需要从传统 HPLC 转移方法。600 bar 系统足以应付 2.7 µm 核壳柱；在 100–150 mm 色谱柱上使用真正的亚 2 µm 填料则需要 1000–1300 bar。二元泵滞留体积低，适合快速梯度，四元设计适合筛选和 pH 调节，对通量影响不大。微流量系统可提高有限样品的质量灵敏度，并便于联接质谱。二维配置可解决复杂基质问题。还要评估自动进样器周期和残留，因为运行很快时进样开销占总时间的比例较大。确认软件支持带滞留体积补偿的方法转换，并且数据完整性功能符合法规要求。## 超高效液相色谱仪用于哪些领域？超高效液相色谱仪广泛用于高通量药物杂质谱分析、多残留农药和兽药筛查、生物分析药代动力学样品分析、强制降解研究、食品饮料污染物检测。## 适用哪些标准与认证？超高效液相色谱仪相关工作通常依据 USP <621>、Ph. Eur. 2.2.46、USP <1058>、ICH Q2(R2)、ChP 0512、IEC 61010-1、ISO/IEC 17025、21 CFR Part 11。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？应使用 LC-MS 级溶剂并将样品过滤至 0.2 µm，因为颗粒物很快会堵塞亚 2 µm 筛板。按制造商计划更换入口过滤器、密封圈和转子密封件，因为压力循环比 HPLC 磨损更快。进样器到检测器之间的管路应短而窄，并使用额定压力合适的零死体积接头。按 USP <1058> 对系统进行确认，核查检测器采样率和梯度准确度。转移 HPLC 方法时，遵循 USP <621> 中允许的调整范围。注意高压部件的安全防护，切勿超过色谱柱的压力限值，UHPLC 色谱柱限值通常为 1000 bar。