二元超高效液相色谱系统

什么是二元超高效液相色谱系统？二元超高效液相色谱系统将两台额定约 1000 bar 的高压泵与低滞留体积、低扩散管路相结合。它是亚 2 µm 色谱柱上快速反相梯度的标准选择，适用于运行时间至关重要的药物杂质谱分析和高通量质量控制。## 概述

二元 UHPLC 配置在增压后混合两种溶剂，滞留体积约 35–100 µL，梯度延迟远低于一分钟。泵在最高 1000 bar 下输送 0.01–2 mL/min，配 1–2 µL 流通池的二极管阵列检测器采样率最高 100 Hz。带快速针清洗、周期小于 20 秒的自动进样器使进样开销较低，主动溶剂预热的柱温箱可减少导致峰变宽的热失配。典型色谱柱为 2.1 × 50–100 mm，填料 1.7–1.9 µm，也可使用 2.7 µm 核壳柱。该系统非常适合梯度时间 3–10 分钟的杂质方法、稳定性指示含量测定以及从常规 HPLC 转移的方法。由于仅有两种溶剂，pH 和改性剂筛选需要手动更换溶剂瓶。## 工作原理是什么？UHPLC 遵循与 HPLC 相同的分配原理，但利用了范第姆特关系：更小的粒径降低涡流扩散和传质阻力，因此在更高线速度下柱效仍保持较高。填料粒径 1.7–1.9 µm 的色谱柱，常见内径 2.1 mm、长 50–150 mm，会产生数百 bar 的背压，这要求泵、阀和进样器的额定压力达到 1000 bar 或更高。必须使用窄径管路、低体积混合器和 1–2 µL 流通池来尽量减小柱外扩散，否则通常仅 1–3 秒宽的窄峰会变宽。需要 40–200 Hz 的快速检测器采样率来定义峰形，柱温箱采用主动预热控制摩擦热。流动相须经 0.2 µm 过滤以保护筛板。在 HPLC 上需 30 分钟的分析往往可在 3–10 分钟内完成。## 主要特点有哪些？- 高压二元混合，滞留体积约 35–100 µL，梯度响应迅速 - 1000 bar 耐压，可在 100–150 mm 色谱柱上使用 1.7 µm 填料 - 二极管阵列检测器，1–2 µL 流通池，采集速率最高 100 Hz - 自动进样器周期小于 20 秒，可编程针清洗以限制残留 - 柱温箱主动溶剂预热，降低摩擦热对柱效的影响

技术参数有哪些？典型的二元超高效液相色谱系统配置：最大工作压力为 100 MPa (1000 bar)；流量范围为 0.01–2 mL/min；滞留体积为 35–100 µL；梯度组成精密度（RSD）为 ≤0.1%；流量精密度（RSD）为 ≤0.05%；进样周期为 ≤20 s。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？二元超高效液相色谱系统主要用于药物杂质谱分析、高通量质量控制放行检测、稳定性指示含量测定、从 HPLC 转移方法。在更广泛的超高效液相色谱仪类别中，实验室还将其用于高通量药物杂质谱分析、多残留农药和兽药筛查、生物分析药代动力学样品分析。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 USP <621>、Ph. Eur. 2.2.46、USP <1058>、ICH Q2(R2)、ChP 0512、IEC 61010-1、ISO/IEC 17025、21 CFR Part 11。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、RoHS；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应使用 LC-MS 级溶剂并将样品过滤至 0.2 µm，因为颗粒物很快会堵塞亚 2 µm 筛板。按制造商计划更换入口过滤器、密封圈和转子密封件，因为压力循环比 HPLC 磨损更快。进样器到检测器之间的管路应短而窄，并使用额定压力合适的零死体积接头。按 USP <1058> 对系统进行确认，核查检测器采样率和梯度准确度。转移 HPLC 方法时，遵循 USP <621> 中允许的调整范围。注意高压部件的安全防护，切勿超过色谱柱的压力限值，UHPLC 色谱柱限值通常为 1000 bar。## 如何选择合适的二元超高效液相色谱系统？当首要目标是速度以及 2.1 mm 色谱柱上的陡峭梯度时，选择二元 UHPLC。如果需要筛选大量缓冲液和改性剂，可考虑四元型号。如果需要超过 1000 bar 的压力，选择 1300 bar 型号。询价时请说明耐压等级、滞留体积、检测器数据速率、自动进样器周期和软件合规功能。### 与其他超高效液相色谱仪型号相比如何？决定性参数包括耐压等级、滞留体积和柱外体积、检测器速度，以及是否需要从传统 HPLC 转移方法。600 bar 系统足以应付 2.7 µm 核壳柱；在 100–150 mm 色谱柱上使用真正的亚 2 µm 填料则需要 1000–1300 bar。二元泵滞留体积低，适合快速梯度，四元设计适合筛选和 pH 调节，对通量影响不大。微流量系统可提高有限样品的质量灵敏度，并便于联接质谱。二维配置可解决复杂基质问题。还要评估自动进样器周期和残留，因为运行很快时进样开销占总时间的比例较大。确认软件支持带滞留体积补偿的方法转换，并且数据完整性功能符合法规要求。