实时荧光定量 PCR 仪

实时荧光定量 PCR 仪的工作原理是什么？实时荧光定量 PCR 系统将 Peltier 或热风加热模块与激发光源、滤光片和检测器结合。反应体系含有荧光报告分子，可以是与双链 DNA 结合的嵌入染料（如 SYBR Green），也可以是序列特异性探针，如水解探针（TaqMan 型）或分子信标。LED 或卤素灯发出的激发光经滤光片组，由光电二极管、PMT 或 CCD 在每个退火或延伸步骤结束时读取发射光。软件绘制荧光—循环数曲线，并在信号越过阈值处给出定量循环值 Cq（或 Ct）。Cq 与起始拷贝数对数成反比，可用于标准曲线法或相对定量。熔解曲线分析可进一步核查产物特异性。## 实时荧光定量 PCR 仪有哪些型号？- 96 孔实时荧光定量 PCR 系统：96 孔实时荧光定量 PCR 系统是标准的 qPCR 平台，可对 96 孔板读取四至六个荧光通道，温度由 Peltier 控制。- 384 孔实时荧光定量 PCR 系统：384 孔实时荧光定量 PCR 系统可通过整板成像或快速扫描读取完整的 384 孔板，反应体积为 5–20 µL。- 六通道多重实时荧光定量 PCR 系统：六通道多重实时荧光定量 PCR 系统通过窄带激发与发射滤光片组，在每个孔内区分多达六种荧光团。- 转子式实时荧光定量 PCR 仪：转子式实时荧光定量 PCR 仪将 36 至 100 支反应管置于环形转子中旋转，由空气加热和冷却，每支管经过光学头时被读取。- 便携式实时荧光定量 PCR 分析仪：便携式实时荧光定量 PCR 分析仪是可电池供电、手提箱大小的 qPCR 设备，具备两至四个通道和 8 至 48 个孔位，专为现场病原体和污染物筛查而设计。## 如何选择合适的型号？首先确定通量和规格：96 孔适合大多数实验室，384 孔适合大批量筛选，转子式或便携式机型适合小批量。其次按多重检测需求匹配光学通道数，四通道可覆盖多数含内参的双重或三重检测，五至六通道可支持更大的检测组合。核对激发与发射滤光片是否适配所用染料，包括 FAM、HEX/VIC、ROX 和 Cy5。比较热均一性与升降温速率、低拷贝检测灵敏度，以及软件功能，如绝对定量、熔解曲线和基因表达分析。对于受监管的诊断应用，应确认审计追踪、用户权限和数据导出选项，并询问是否提供 IVD 注册支持。## 实时荧光定量 PCR 仪用于哪些领域？实时荧光定量 PCR 仪广泛用于临床病原体核酸检测、RT-qPCR 基因表达分析、食品与转基因检测、环境与水体微生物检测、拷贝数与 SNP 分析。## 适用哪些标准与认证？实时荧光定量 PCR 仪相关工作通常依据 ISO 20395、ISO 22174、CLSI MM06、CLSI MM19、IEC 61010-1、IEC 61010-2-101、MIQE guidelines (research reporting)。CE 等仪器认证需按具体配置逐项确认，不作默认承诺。## 采购前需要考虑哪些要点？应将仪器安装在水平、无振动的台面上，避开阳光，环境温度 15–30 °C，市电稳定。安装时以及更换灯泡或 LED 后，应使用供应商提供的染料或 ROX 校准板进行光学校准，并每年验证一次热均一性。使用与孔位规格匹配的光学透明、低荧光背景的板和封膜，避免在封膜上留下指纹。PCR 前后区域应分开，切勿在仪器附近打开已扩增的板。临床实验室应按质量体系规划软件验证、权限控制和审计追踪，并备份运行文件与熔解曲线数据。