荧光 Western Blot 成像系统

什么是荧光 Western Blot 成像系统？该系统激发印迹上荧光标记的抗体并在一次成像中采集两个或更多通道，实现多指标检测和总蛋白归一化，适合需要在同一张膜上比较多个目标而无需剥离重孵的实验室。## 概述

具有不同激发和发射光谱的荧光结合物可同时或依次加入，仪器用 LED 或激光激发并配相应滤光片在各通道波长下对膜成像。由于信号在光谱上分离，可在同一张印迹上测定两个或更多目标，且可用总蛋白通道代替单一管家带作为上样对照。灵敏度取决于荧光团、结合物质量和膜的自发荧光本底，因此通常要求使用低荧光膜和合适的封闭试剂。该系统也支持使用不同标记的多指标诊断印迹，定量输出需要按通道校准并注意避免通道之间的信号串扰。## 工作原理是什么？免疫印迹始于两种蛋白来源：一种通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转印到膜上，另一种直接以离散线条形式点加在试条上。膜经封闭处理以减少非特异性结合，再与稀释的患者样本温育，使样本中的抗体与目标抗原结合。洗涤后加入酶标记或荧光标记的抗人抗体，底物产生与结合抗体成正比的可见、发光或荧光信号。试条可通过目视、扫描光密度仪或电荷耦合器件相机读取，每条带按缺失、弱、中等或强烈评分，或相对于对照带定量为强度比。确认试验的判读标准由制造商和各国指南规定，报告结果取决于反应带的整体模式而非单一条带。## 主要特点有哪些？- LED 或激光激发并配相应发射滤光片 - 可同时采集两个或以上通道 - 可用总蛋白通道作为上样对照 - 兼容低自发荧光膜 - 支持多指标诊断印迹 - 按通道校准以限制信号串扰

技术参数有哪些？典型的荧光 Western Blot 成像系统配置：激发光源为 LED or laser at 488, 532, 635 and 685 nm；发射滤光片为 4–6 bandpass filters, 520–800 nm；通道数为 Two-colour or four-colour simultaneous imaging；检测器为 Cooled CCD or complementary metal oxide sensor；膜尺寸为 Up to 10 × 15 cm；灵敏度为 Low nanogram to picogram range per band depending on the label。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？荧光 Western Blot 成像系统主要用于多指标蛋白表达研究、带内对照的诊断印迹确认、自身免疫抗原多指标印迹、需要总蛋白归一化的研究。在更广泛的免疫印迹系统类别中，实验室还将其用于 HIV 和肝炎确认检测、自身免疫抗体组合检测、莱姆病和梅毒确认检测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 15189、CLSI M53、CLSI EP05、CLSI EP17、WHO HIV testing strategy、IEC 61010-1、IEC 61010-2-101。本型号的认证候选包括 CE、ISO 13485 manufacturing、NMPA registration for research use；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应在洁净台面上戴手套操作，因为膜容易被污染；并且只使用试剂盒规定的缓冲液和稀释比例，因为盐浓度和 pH 会改变结合与洗涤效率。保持温育温度和时间的稳定，因为条带强度受两者影响，并避免试条在各步骤之间干燥。安装时用试剂盒的阳性与阴性对照品验证性能，若有能力验证样本集也应使用，并在每换一个试剂批号时重复检查。定期清洁扫描仪或成像光路，荧光和发光检测需保持光源稳定，图像应与患者标识一同保存至当地法规要求的期限。## 如何选择合适的荧光 Western Blot 成像系统？当需要在一张膜上测定两个或更多目标、用总蛋白通道替代单一上样对照，或诊断印迹带有内标标记对照时，应指定该系统。询价时确认通道分离性能、为降低自发荧光推荐的膜和封闭试剂，以及软件的归一化流程。### 与其他免疫印迹系统型号相比如何？首先确定实验室是手工处理试条还是需要自动温育和洗涤，因为处理步骤决定人工时间和重复性。随后选择读数方式：目视读数适合低工作量且为许多线性免疫印迹项目所接受，光密度分析可给出客观的条带强度，相机成像则支持化学发光和多指标荧光。确认仪器兼容所用试剂盒的试条和膜规格、软件能应用制造商的判读标准，且图像和结果能以可检索格式归档。确认检测项目在目标市场的注册状态，以及质控品、结合物和底物的供应，因为这些耗材与试剂盒绑定且有效期可能较短。