化学发光 Western Blot 成像系统

什么是化学发光 Western Blot 成像系统？该成像系统使用制冷电荷耦合器件相机采集化学发光 Western Blot 膜发射的光并定量条带强度，无需胶片，适合需要高灵敏度检测、宽线性范围和数字记录的实验室。## 概述

膜与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶结合物及化学发光底物温育，结合物所在位置发射的光由制冷相机捕获。制冷可降低暗电流，使长曝光得到低噪声图像，软件扣除本底、定位泳道和条带，并相对于上样对照计算归一化强度。与胶片不同，相机的线性响应范围更宽，条带不易饱和，跨膜的定量比较也更可靠。可对同一张膜进行多次不同曝光以兼顾弱带和强带，图像可与分析结果一并保存。典型仪器支持多种膜尺寸，并配有白光或荧光通道用于总蛋白归一化。## 工作原理是什么？免疫印迹始于两种蛋白来源：一种通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转印到膜上，另一种直接以离散线条形式点加在试条上。膜经封闭处理以减少非特异性结合，再与稀释的患者样本温育，使样本中的抗体与目标抗原结合。洗涤后加入酶标记或荧光标记的抗人抗体，底物产生与结合抗体成正比的可见、发光或荧光信号。试条可通过目视、扫描光密度仪或电荷耦合器件相机读取，每条带按缺失、弱、中等或强烈评分，或相对于对照带定量为强度比。确认试验的判读标准由制造商和各国指南规定，报告结果取决于反应带的整体模式而非单一条带。## 主要特点有哪些？- 制冷电荷耦合器件相机，暗电流低 - 相比胶片检测具有更宽的线性动态范围 - 可对同一张膜进行多次曝光采集 - 自动定位泳道和条带并扣除本底 - 提供白光或荧光通道用于总蛋白归一化 - 数字图像与分析参数一并归档

技术参数有哪些？典型的化学发光 Western Blot 成像系统配置：检测器为 Cooled CCD, −25 to −40 °C；动态范围为 Typically 4 orders of magnitude；曝光范围为 0.1 s to 30 min programmable；膜尺寸为 Up to 20 × 20 cm；光通道为 Chemiluminescence, white light, optional fluorescence；分辨率为 1–5 megapixel images per exposure。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？化学发光 Western Blot 成像系统主要用于 Western Blot 确认检测、科研蛋白表达研究、自身免疫印迹确认、抗原制备的质量控制。在更广泛的免疫印迹系统类别中，实验室还将其用于 HIV 和肝炎确认检测、自身免疫抗体组合检测、莱姆病和梅毒确认检测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 15189、CLSI M53、CLSI EP05、CLSI EP17、WHO HIV testing strategy、IEC 61010-1、IEC 61010-2-101。本型号的认证候选包括 CE、ISO 13485 manufacturing、NMPA registration for research use；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。应在洁净台面上戴手套操作，因为膜容易被污染；并且只使用试剂盒规定的缓冲液和稀释比例，因为盐浓度和 pH 会改变结合与洗涤效率。保持温育温度和时间的稳定，因为条带强度受两者影响，并避免试条在各步骤之间干燥。安装时用试剂盒的阳性与阴性对照品验证性能，若有能力验证样本集也应使用，并在每换一个试剂批号时重复检查。定期清洁扫描仪或成像光路，荧光和发光检测需保持光源稳定，图像应与患者标识一同保存至当地法规要求的期限。## 如何选择合适的化学发光 Western Blot 成像系统？当采用化学发光检测、拟淘汰胶片判读，或需要跨泳道的定量条带比较时，应指定该成像系统。询价时确认检测器制冷指标、可达动态范围、曝光控制，以及软件是否支持实验室所用的归一化策略。### 与其他免疫印迹系统型号相比如何？首先确定实验室是手工处理试条还是需要自动温育和洗涤，因为处理步骤决定人工时间和重复性。随后选择读数方式：目视读数适合低工作量且为许多线性免疫印迹项目所接受，光密度分析可给出客观的条带强度，相机成像则支持化学发光和多指标荧光。确认仪器兼容所用试剂盒的试条和膜规格、软件能应用制造商的判读标准，且图像和结果能以可检索格式归档。确认检测项目在目标市场的注册状态，以及质控品、结合物和底物的供应，因为这些耗材与试剂盒绑定且有效期可能较短。