成像型细胞分选仪

什么是成像型细胞分选仪？成像型细胞分选仪除荧光强度外，还对每个细胞拍摄高速图像，并依据形态、定位或细胞间相互作用进行分选。当表型无法仅凭强度分辨时，例如核转位或双联体鉴别，应选择此类仪器。## 概述

成像型分选仪将流式细胞术与高速成像相结合，使用时间延迟积分相机、光学时间拉伸或频率编码方法，在每个细胞通过检测点时获取其图像。由图像导出的特征，如细胞面积、核质比、蛋白定位、细胞器数量或细胞间接触，会被实时计算，并与散射和荧光一起作为分选参数。由于数据量和处理需求，通量低于传统分选仪，通常为每秒 1,000 至 15,000 个事件。分选可基于液滴，也可通过集成的微流控执行器实现。这类仪器使得通过分选后测序将空间表型与基因型关联成为可能，需要专门的分析软件和经培训的用户基于图像特征构建设门。## 工作原理是什么？分选仪像分析仪一样分析细胞，然后实时做出分选决定。在液滴式分选仪中，压电换能器以 20 至 100 kHz 的频率振动喷嘴，使液流在激光检测点之后断裂为均匀液滴。当符合分选门的细胞即将被包裹进液滴时，电子系统对液流施加电荷，液滴断裂时即携带该电荷。带电液滴通过高压偏转板，落入收集管或多孔板，不带电的液滴则进入废液。用荧光微球校准的液滴延迟定义了从检测到液滴断裂的时间。微流控芯片分选仪则在一次性芯片内使用阀门、压电执行器或光学力，将样品封闭在气溶胶之外。## 主要特点有哪些？- 对每个细胞在明场和荧光通道进行高速成像 - 图像衍生特征可作为分选设门参数实时使用 - 按形态、蛋白定位或细胞间相互作用分选 - 基于图像的设门改善双联体和碎片鉴别 - 索引分选将图像特征与下游测序数据关联 - 专用软件用于图像特征提取和机器学习分类

技术参数有哪些？典型的成像型细胞分选仪配置：成像模式为 Brightfield plus up to 4 fluorescence；图像分辨率为 Approx. 0.5–1 µm per pixel；激光器配置为 2–4 (405/488/561/640 nm)；最大分选速率为 1,000–15,000 events/s；分选流路数为 2-way (typical)；图像衍生特征为 Area, circularity, localization, texture。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？成像型细胞分选仪主要用于按蛋白定位分选、核转位和信号转导研究、细胞间相互作用和双联体分析、基于形态的测序前分选、吞噬和内化检测。在更广泛的细胞分选仪类别中，实验室还将其用于干细胞和祖细胞富集、工程细胞株单细胞克隆、单细胞 RNA 测序前分选。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISAC Cell Sorter Biosafety Standards、IEC 61010-1、IEC 60825-1、EN 12469、ISO 14698-1、CLSI H62、ISAC FCS 3.1。本型号的认证候选包括 CE、IEC 61010-1 compliance、IEC 60825-1 laser classification；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。分选仪需要洁净、温度稳定的房间、压缩空气或氮气供应，通常还需要专职操作人员。每日用校准微球进行设置，以确定液滴延迟、验证液流稳定性并检查分选准确性。每个样品前后用次氯酸钠或专用清洗液对液路进行去污，原代细胞工作时还应对鞘液通路灭菌。分选人源或感染性材料需进行生物安全评估，并通过碘化钾或荧光微球法等气溶胶测试验证防护效果。喷嘴、O 型圈和鞘液过滤器属于耗材，应按计划更换。实验室应记录分选、纯度检查和预防性维护，以支持可重复性和审计。## 如何选择合适的成像型细胞分选仪？仅当目标表型依赖空间或形态信息时，才应选择成像型分选仪，因为其速度比基于强度的分选仪慢且成本更高。询价时应说明成像通道、分辨率、分选速率、可用图像特征以及数据存储和分析要求。### 与其他细胞分选仪型号相比如何？选择分选仪应以纯度、得率、活率和防护要求为依据。首先确定需要同时收集的细胞群数量，双路、四路和六路分选需要不同的偏转硬件。根据细胞大小和脆弱程度匹配 70 至 130 微米的喷嘴，原代细胞宜采用较大喷嘴和较低压力。核对通常为每秒 20,000 至 70,000 个事件的分选速度，并结合中止率和回收率评估。对于感染性、人源原代或病毒载体样品，应指定带气溶胶管理的封闭式系统和二级生物安全柜。还应考虑单细胞沉积到 96 或 384 孔板、索引分选、激光器数量和易用性，并确认无菌液路清洁方式以及服务工程师的可用性。