等温扩增荧光检测仪

什么是等温扩增荧光检测仪？等温扩增荧光检测仪使反应保持恒温（LAMP 通常为 60 至 65 °C），同时实时监测荧光。它无需热循环，提供简单快速的核酸检测，适用于现场筛查、资源有限的实验室和快速检测方法开发。## 概述

环介导等温扩增（LAMP）和重组酶聚合酶扩增（RPA）等等温扩增方法使用链置换聚合酶或重组酶体系在恒温下扩增靶标，无需快速热循环。检测仪由精确控温的加热模块（通常为 35 至 70 °C）和读取荧光嵌入染料或淬灭探针的光学模块组成，通常有一到两个通道。以分钟表示的出峰时间取代了 Cq，大多数 LAMP 检测在 15 至 40 分钟内给出结果。结构简单使成本较低，并可实现电池供电。由于 LAMP 使用四到六条引物并产生大量扩增产物，交叉污染风险较高，因此密闭管检测和严格的流程分区至关重要。## 工作原理是什么？分子分析仪器对核酸靶标进行扩增并通过荧光监测反应。在实时荧光定量 PCR 中，热模块在变性、退火和延伸之间循环，光学系统在每个循环读取 SYBR Green 等嵌入染料或 TaqMan 等水解探针的信号。荧光越过阈值时的循环数，即定量循环数（Cq），与起始拷贝数呈反比，通过标准曲线或比较法可得到相对或绝对量。数字 PCR 将反应分割为数千个纳升级微滴或微孔，分别扩增并统计阳性分区，然后利用泊松统计得到绝对拷贝数，无需标准曲线。LAMP 等等温方法在恒温下扩增，并检测荧光或浊度。熔解曲线分析用于验证产物特异性。## 主要特点有哪些？- 约 35 至 70 °C 的恒温模块，适用于 LAMP 和 RPA。- 实时荧光读取，以分钟报告出峰时间。- 结构简单，可做成紧凑、低功耗和可电池供电的设计。- 典型 LAMP 结果在 15 至 40 分钟内出现。- 密闭管检测限制扩增产物交叉污染。- 多个独立加热位，可对不同管设置不同温度。## 技术参数有哪些？典型的等温扩增荧光检测仪配置：样品容量为 8–48 tubes；温度范围为 35–70 °C；温度稳定性为 ±0.2 °C；反应体积为 10–25 μL；荧光通道为 1–2 (FAM/SYBR-type)；出结果时间为 15–40 min (LAMP)。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？等温扩增荧光检测仪主要用于基于 LAMP 的病原体筛查、食品和转基因快速筛查、植物和动物疫病检测、等温检测方法开发。在更广泛的分子分析仪器类别中，实验室还将其用于基因表达分析、病原体检测方法开发、病毒载体和残留 DNA 定量。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 IEC 61010-1、IEC 61010-2-010、IEC 61010-2-101、IEC 61326-2-6、ISO 20395、ISO 22174、MIQE guidelines。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。分子分析仪器需要严格的污染控制：分开扩增前和扩增后区域，使用带滤芯吸头，并设置无模板对照。应定期用经校准的温度探头核查热模块的温度准确性和均一性，并在安装后及按制造商建议的间隔，使用染料板进行光学校准。仪器应放在稳定的台面上并保持良好通风，并避免灯或 LED 不必要的曝光。报告 qPCR 数据时应遵循 MIQE 指南，并存档原始荧光数据。受监管的实验室应确认软件的访问控制和审计追踪功能。## 如何选择合适的等温扩增荧光检测仪？对于使用 LAMP 或 RPA 检测的快速、简便筛查，或热循环仪不便使用的环境，应选择等温检测仪。询价时应说明温度范围、通道数、管容量和供电选项。对于检测种类广泛的定量，实时荧光定量 PCR 系统的精密度和多重能力更好。### 与其他分子分析仪器型号相比如何？首先在相对定量和绝对定量之间做出选择：相对定量通常使用实时荧光定量 PCR 即可，而对稀有靶标或微小倍数变化进行绝对定量时，数字 PCR 精密度更好。使孔板规格与通量匹配：96 孔适合常规工作，384 孔适合筛选。根据多重检测需求核对光学通道数，多重检测组合通常需要四到六个通道。为保证重复性，应考虑升降温速率和运行时间、模块均一性以及热盖加热。对于现场或即时检测，电池供电并使用冻干试剂的便携式分析仪更合适。还要核查试剂的开放性、分析和导出软件功能，以及仪器能否支持受监管流程所需的验证文件。