台式短读长测序仪

什么是台式短读长测序仪？台式短读长测序仪读取 75–300 个碱基的片段，准确度很高，单轮产出 15–150 Gb，一天内即可完成外显子组、RNA 测序和大型组合检测，是通量适中的科研和临床基因组学实验室的常规选择。## 概述

台式短读长测序仪把生产型平台的化学体系和光学系统集成到约半平方米的机身中。文库加载到图案化流动池上形成簇，随后按循环进行合成法测序，采用四色或双色成像。单轮产出通常为 15–150 Gb，读长 75–300 个碱基，原始错误率低于 1%。根据读长不同，运行时间约 12 至 30 小时。机载或连接的软件可完成碱基判定、拆分样品、比对和变异检测，并能将结果推送至实验室信息系统。多数机型支持多种文库试剂盒，包括全基因组、外显子、RNA 和扩增子化学体系，并支持双端索引，单轮可混合 24–384 个样品。周转时间通常为一个工作日，适合临床和共享平台的工作流程。## 工作原理是什么？多数高通量测序仪采用合成法测序。将带接头的片段文库加载到流动池或磁珠表面，先形成克隆簇，使每个局部信号都来自大量相同拷贝。聚合酶逐一掺入带可逆终止子和荧光标记的核苷酸；每个循环后仪器对表面成像，记录每个簇的碱基颜色，再切除终止基团以便掺入下一个碱基。碱基判定结果组合成读长，并与参考序列比对。纳米孔仪器则使单链穿过蛋白孔道，读取每个碱基对应的特征电流变化。桑格测序仪用链终止双脱氧核苷酸标记片段，再通过毛细管电泳和激光诱导荧光检测进行分离。## 主要特点有哪些？- 读长 75 至 300 个碱基，运行模式可配置 - 单轮产出 15–150 Gb，可处理外显子组、RNA 和大型组合 - 机载碱基判定、比对与变异检测软件 - 双端索引支持每次运行混合 24–384 个样品 - 即装即用卡盒试剂，人工操作时间缩短至数分钟 - 具备审计追踪并可与实验室信息系统连接

技术参数有哪些？典型的台式短读长测序仪配置：读长为 75–300 bp (mode dependent)；单轮产出为 15–150 Gb；运行时间为 approx. 12–30 h；原始准确度为 over 99% (typical)；流动池规格为 Patterned flow cell, single use；单轮样品数为 24–384 with dual indexing。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？台式短读长测序仪主要用于外显子组与靶向组合测序、RNA 测序与表达分析、微生物全基因组测序、临床变异检测。在更广泛的 DNA 测序仪类别中，实验室还将其用于全基因组与外显子组重测序、RNA 测序与基因表达谱分析、病原体全基因组监测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20395、ISO 22174、ISO 15189、CLSI MM09、IEC 61010-1、ISO 17025。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。测序仪需要稳固的台面、洁净电源以及温度和粉尘受控的房间，因为光学系统和流动池表面对环境敏感。合成法测序平台通常随附专用计算服务器，需要明确的数据路径、备份策略和防火墙规则。应预算每轮运行的耗材、流动池有效期以及大体积序列文件的存储，数年内存储成本往往超过仪器价格。要清洁消毒仪器区域，并分设 PCR 前区和 PCR 后区以避免扩增产物污染。安装时及重大维修后，应使用参考基因组或对照文库验证准确度和重复性。人类样品测序数据须按当地隐私法规处理，用于临床时还需满足 ISO 15189 认可要求。## 如何选择合适的台式短读长测序仪？当主要工作是外显子组、RNA 文库或数百个靶标的组合检测，且一个工作日的周转时间足够时，应选择台式短读长测序仪。询价时应注明读长、单轮产出、流动池选项、支持的文库试剂盒、机载分析能力以及索引是否开放，并明确数据存储和服务响应条款。### 与其他 DNA 测序仪型号相比如何？选择测序仪应依据读长、产出量和准确度，而不是宣传中的规格数字。全基因组重测序、外显子组、RNA 测序和大型扩增子组合，通常选择单轮产出 15–150 Gb 的台式短读长仪器，可获得最低的每样品成本和最简单的工作流程。每周样品量大的生产型实验室应比较每吉碱基成本、运行时间和自动化上样方式，并确认索引和流动池是开放还是专有。当需要解析重复序列、结构变异、全长转录本或天然 DNA 修饰时，长读长平台具有决定性优势。对于周转时间更重要的单靶标确证、质粒和扩增子检查，仍应保留一台毛细管测序仪。订购前应确认支持的文库试剂盒、机载或服务器分析软件、数据存储方案和生物信息支持。