荧光激活细胞分选仪

什么是荧光激活细胞分选仪？荧光激活细胞分选仪在液流中逐个检测细胞，对含目标细胞的液滴充电并偏转至收集管，可获得 98–99.9% 的纯度，并能将单细胞按索引信息分配到微孔板中。## 概述

用荧光抗体染色的细胞逐个通过激光检测点，仪器在微秒级判断细胞是否符合分选条件。压电元件使喷嘴振动并将液流断裂为液滴，选定液滴在通过偏转板之前被充电，从而被导入指定的收集容器。可同时收集多个细胞群，单细胞模式可每孔分配一个细胞，用于克隆或测序并记录索引信息。实际分选速度为每秒 5,000–30,000 个事件，纯度 98–99.9%，回收率 70–90%。激光器属于 IEC 60825-1 范畴，处理潜在感染性样品时需配备气溶胶防护，并由受训操作人员操作且定期进行光学质控。## 工作原理是什么？分离利用目标细胞与样品其余部分在物理或生化性质上的差异。免疫磁法用抗体偶联磁珠标记细胞，再在磁场中的分离柱内保留标记细胞，或标记目标之外的细胞而让所需细胞直接流出。荧光激活分选先用荧光抗体染色，在液流中逐个检测细胞，并对含目标细胞的液滴充电，使其偏转进入收集管。微流控分选依靠窄通道、声波或光镊力使细胞偏转，无需液滴。密度法将样品铺在特定密度介质上，离心时不同密度的细胞在不同界面形成条带。各方法在纯度、产量、速度和处理温和程度之间取舍不同，下游检测决定可接受哪种组合。## 主要特点有哪些？- 气吹式或流通池分选，采用压电液滴生成 - 两到五束激光，最多 20 个荧光检测器 - 分选速度每秒 5,000–30,000 个事件 - 纯度 98–99.9%，回收率 70–90% - 单细胞分配至微孔板并支持索引分选 - 可选气溶胶防护，适合感染性样品

技术参数有哪些？典型的荧光激活细胞分选仪配置：激光器为 2–5 lines, typically 405, 488, 561 and 640 nm；荧光检测器为 up to 20；分选速度为 5,000–30,000 events per second；纯度为 98–99.9% (population dependent)；回收率为 70–90% (typical)；收集形式为 Tubes, plates and single-cell deposition。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？荧光激活细胞分选仪主要用于用于下游测序的稀有细胞分离、单细胞克隆与微孔板分配、用于功能检测的免疫亚群纯化、带报告基因筛选的细胞系开发。在更广泛的细胞分离系统类别中，实验室还将其用于 T 细胞与免疫亚群分离、干细胞与祖细胞富集、细胞治疗起始材料制备。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 ISO 20387、USP <1046>、IEC 61010-1、IEC 61010-2-020、IEC 60825-1、ISO 15189。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing、IEC 61010-1 safety、IEC 60825-1 laser safety；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。操作应在生物安全柜内并使用适当的防护等级，除方案另有规定外分离缓冲液应保持低温，因为细胞对操作的敏感性往往高于对方法本身的敏感性。应使用新鲜抗体和磁珠，避免剧烈吹打，并通过 30–40 µm 滤网过滤样品以防分离柱或喷嘴堵塞。应包含去除死细胞的步骤，因为死细胞会非特异性结合并降低纯度。分离后应通过流式细胞术验证纯度和活率，并在每次制备中记录回收率和纯度。细胞治疗流程要求无菌操作和封闭系统，其分离属于 ISO 20387 和 USP <1046> 要求下的经验证流程，需要记录操作人员培训及试剂与批号的可追溯性。## 如何选择合适的荧光激活细胞分选仪？当需要高于 98% 的纯度、一次运行分离多个细胞群，或需按索引信息分配单细胞时，应选择流式分选仪。询价时应注明激光与检测器配置、分选速度、喷嘴选项、气溶胶防护以及索引分选能力。### 与其他细胞分离系统型号相比如何？应根据所需纯度、产量、细胞数量和下游应用选择。磁性分离快速、温和、易于放大，适用于 10⁷ 至 10⁹ 个细胞，无需分选仪器，但纯度通常为 90–98%，可能不足以支持单细胞测序。荧光激活分选可达 98–99.9% 纯度，能将单细胞按索引信息分配至微孔板并支持多参数设门，但通量较低、剪切力较高且需要专业操作。微流控和声波方法适合小体积样品以及对剪切敏感的细胞类型。密度梯度分离仍是血液和骨髓的首选第一步，随后用磁性或流式方法进一步纯化。还应确认标记物、缓冲液和耗材与下游培养、功能检测及法规要求兼容。