荧光细胞计数与活率分析仪

什么是荧光细胞计数与活率分析仪？荧光细胞计数与活率分析仪使用吖啶橙和碘化丙啶染色并通过荧光成像，对有核细胞计数并测定活率。对于原代细胞、PBMC 和含碎片较多的样品，明场台盼蓝方法不可靠，此时它是更好的选择。## 概述

荧光计数仪在图像式平台上增加了激发 LED 和发射滤光片，通常为用于吖啶橙（绿色发射）的蓝光通道和用于碘化丙啶（红色发射）的绿光通道。吖啶橙可穿透所有有核细胞，而碘化丙啶只进入膜受损细胞，因此可通过颜色区分活细胞和死细胞。由于红细胞、血小板和碎片等无核颗粒不发荧光，该方法可在不裂解的情况下对全血或骨髓中的有核细胞计数。计数范围通常为 5 × 10⁴ 至 3 × 10⁷ 个细胞/mL，分析约需 30 秒。部分型号还提供用于台盼蓝的明场模式。荧光方法需要配套耗材和避光光学系统，并应明确 LED 寿命。## 工作原理是什么？细胞分析仪器有三种主要检测原理。图像式计数仪对计数池中的细胞拍照，再由软件分割细胞，并通过染料排除法（如台盼蓝）或吖啶橙/碘化丙啶荧光判断细胞死活。基于库尔特原理的阻抗计数仪使细胞通过微孔，记录电阻脉冲，其幅度与细胞体积成正比。流式细胞仪通过流体动力学聚焦使细胞单列通过一束或多束激光，经二向色镜和带通滤光片检测前向散射、侧向散射和荧光，并用光电倍增管或雪崩光电二极管将光子转换为数字事件。软件随后对细胞群设门，并报告浓度、活率、大小分布和标志物表达。## 主要特点有哪些？- 吖啶橙和碘化丙啶双荧光通道。- 对有核细胞计数，不受红细胞和碎片干扰。- 可选明场模式，用于台盼蓝检测。- 自动对焦和多视野成像提高计数统计性。- 针对 PBMC、骨髓和细胞系提供已验证的检测方案。- 图像存档，可选支持审计追踪的软件。## 技术参数有哪些？典型的荧光细胞计数与活率分析仪配置：计数范围为 5 × 10⁴–3 × 10⁷ cells/mL；荧光通道为 2 (green, red)；激发光源为 Blue and green LEDs；样品体积为 20 μL；分析时间为 approx. 30 s；活率染料为 AO/PI; trypan blue in brightfield。以上数值代表该产品类别的常见水平，具体配置参数以报价单及随机校准文件为准。## 适用于哪些应用？荧光细胞计数与活率分析仪主要用于 PBMC 和淋巴细胞分离质控、细胞治疗产品放行检测、骨髓和全血有核细胞计数、原代细胞培养。在更广泛的细胞分析仪器类别中，实验室还将其用于细胞培养接种和传代、细胞治疗产品表征、生物工艺活率监测。## 适用哪些标准与认证？相关标准与方法包括 IEC 61010-1、IEC 61010-2-101、IEC 61326-2-6、IEC 60825-1、ISO 13322-1、ISO 13319。本型号的认证候选包括 CE、ISO 9001 manufacturing；每项认证均需针对具体配置在发货前确认，仅提供已实际签发的证书。细胞分析仪需要定期进行光学和流路核查。图像式计数仪应使用计数微球或乳胶标准品核查，阻抗计数仪应使用相应孔径的校准颗粒。流式细胞仪需要每天用荧光微球做质量控制，每次使用后清洗流路，并定期检查激光对准。流式细胞仪应远离振动和热源，保证电源稳定，必要时对生物危害样品的废液执行消毒程序。应使用已验证批次的耗材，轻柔处理细胞悬液以避免结团，并统一染料浓度和孵育时间。受监管的实验室应核查软件的访问控制和审计追踪功能。## 如何选择合适的荧光细胞计数与活率分析仪？当样品含红细胞、血小板或碎片，或低细胞浓度需要荧光灵敏度时，应选择此类型。询价时应说明通道数、染料化学体系、耗材、验证文件和软件控制功能。对于干净的细胞系培养，明场计数仪通常已足够且更经济。### 与其他细胞分析仪器型号相比如何？首先明确需要回答的问题。如果只需要浓度和活率，图像式计数仪或阻抗计数仪快速且成本较低。如果需要免疫分型、细胞周期或凋亡分析，则需要流式细胞仪，并且激光器和检测通道要与所用荧光染料匹配。考虑样品特性：细胞团块、碎片、原代细胞或血小板会影响图像分割，小颗粒则需要合适孔径的阻抗检测孔。核对计数范围（每 mL 细胞数）和所需样品量，对稀缺样品尤其重要。评估耗材成本，因为计数板或芯片往往占运行成本的大部分。确认软件的数据导出、用户控制和审计追踪功能，以及仪器是否支持细胞治疗或生物工艺流程中的样品类型。